食品微生物检验中无菌操作技术

摘 要：进行食品微生物检验时,对采样、取样及检验等环节严格的进行无菌操作的目的是为了得到反映食品卫生质量的准确数据,如果任意一个环节出现问题,那么都有可能导致检验的结果出现误差,检验也就失去意义.在检验过程中,要防止不规范的操作导致污染的发生,除此以外,加强无菌操作也是为了对检验人员自身安全的保护.

关 键 词：食品卫生微生物检验无菌操作保护

中图分类号：TS207文献标识码：A文章编号：1672-3791（2014）05（b）-0040-02

进行食品微生物检验是对食品中的菌落总数、致病菌、霉菌、大肠菌群及酵母菌等繁殖情况进行测定,对被测食品的卫生情况进行评价,从而为卫生、安全的食品生产提供依据.微生物在自然界中广泛的分布,食品中的脂肪、蛋白质及糖等也为微生物的生存提供了条件,也因此在检验中检验的准确性极容易受到干扰,为了保证检验结果的准确性,必须在采样、取样及检验等过程中进行无菌操作.

1无菌操作及注意事项

所谓无菌,指的是环境中不存在保证生命活动的营养细胞的状态.而无菌操作则是采用无菌器材进行植物组织、细胞传代、细胞接种等培养操作,防止微生物进入无菌范围,在微生物检验中,无菌操作是重要的理念,只有在检测设备、培养菌无菌的基础上,才能确保样品不被污染,检验的结果才能更准确.一定程度上可以将无菌操作理解为安全操作.

在进行无菌操作时应该注意以下几个方面：（1）按照食品微生物检验相关标准,对于一般的检验样品要在干净的区域内进行,包含实验室、工作台等,而对于病原微生物分离工作则需要在生物二级实验室进行.要保证无菌室的清洁,定期对墙壁、桌面、台面等进行消毒,在使用之前,要先用紫外线灯照射30min.对实验室沉降菌定期进行计数,对微生物生长繁殖情况进行检查,在无菌室内尽量减少走到,禁止在无菌室内谈笑.（2）进入无菌室前,检验人员要洗手,在缓冲室更换工作衣、鞋、帽等,无菌室外的工作衣、鞋、帽等严格禁止进入无菌室.（3）在微生物检验过程中,打开样品时,检验人员要与样品保持一定距离,没有经过消毒的物体不能接触样品,样品暴露在空气中的时间要尽可能的短,采用无菌工具取样,检验人员的手臂不能放置在样品上方,取出的样品不能再放回原处.操作要慢,速度不能过快,接种用具在使用前和使用后都必须精要灼烧灭菌,吸管不能直接用嘴吸.（4）在开启袋口、瓶口之前,要用酒精棉球擦拭消毒,对液体培养物接种时,不能使菌液溅在其它器皿或工作台上,防止污染,如果不小心溅到,用酒精棉球灼烧灭菌,最后用消毒液擦干净.带有菌液的玻片或吸管,最后要在消毒液中消毒.（5）无菌物品应该分类放置,定期检查,不能和没有灭菌的物品混放.

2无菌操作技术

2.1显微镜技术

由于微生物非常小,肉眼很难观察,因此必须借助显微镜进行观察,光学显微镜是实验室微生物形态观察的常用仪器.在使用显微镜技术使,染色、涂片等技术必不可少,不管是染色还是涂片时,都要进行无菌操作,防止杂菌污染,一旦玻片受到污染,观察的结果就会受到影响.所以,在操作的过程中,为了实现无菌操作,应该注意以下几点：第一,对平板培养物进行实验室观察时,通常不进行开盖观察,可以对检验结果进行开盖检查,例如在移植培养或取样涂片时,可以适度开缝,但是不能完全揭开；第二,进行涂片时,玻片必须用架子夹持,不能用手直接接触玻片,避免细菌感染；第三,用过的玻片要进行消毒处理.

2.2无菌操作技术

进行微生物检验时,菌种的接种、分离及移植等操作必须排除杂菌干扰,才能得到符合要求的培养体.这就需要一个无杂菌污染的工作环境,在这个环境内严格进行无菌操作,才能最大限度保证操作的安全性.一般情况下,无菌接种可以在酒精灯旁进行,如果要求比较严格,可以在无菌室内配合生物安全柜或超净工作台进行操作.

无菌操作技术主要包含三个方面：无菌环境、无菌器材及无菌操作.首先,无菌环境.这是相对而言的,在无菌室内,一般可以提供无菌环境,但是需要生物安全柜等隔离设备,对有害悬浮微粒进行隔离,从而保证样品、环境及操作人员的安全.在无菌室布置时,要合理布局,满足操作安全、方便及成本适中等要求.对于生物安全柜而言,容易消毒灭菌、体积小、可移动,但是在操作中不是很方便,对一般接种操作比较适用,如致病菌检验接种操作；而超净工作台在目前经常使用,其无菌状态主要通过超细过滤无菌空气实现的.其次,无菌器材.用于微生物检验的无菌器材可分为：器材灭菌与器材消毒.对于器材灭菌而言,只要是在检验过程中使用到的器材,除过不能进行灭菌处理的,都要进行灭菌处理,如稀释剂、培养基、玻璃器皿、乳胶头及胶管等,对于金属器材的灭菌,要先用包装纸包裹后再进行；对于器材消毒而言,只要是针对检验中使用的不能用灭菌处理的器材,则要进行消毒处理,例如工作服、天平、试管架等,一般采用化学药品喷洒、擦拭或熏蒸等方法.最后,无菌操作.无菌操作在上文已经分析过,在此不作具体说明.

2.3纯种分离技术

为了对食品微生物的种群进行鉴定,则要进行分离,获取某一菌株的纯培养物,这个过程称之为微生物分离和纯化.为了获取某一种微生物的纯培养物,通常按照该微生物的特性,设计适合的培养条件与培养基,使该微生物进行生长与繁殖,或者是加入抑制其它微生物生长的抑制因素,从而淘汰掉其它杂菌.通过各种稀释法,最终在培养基上形成单菌落.此时还不能保证一定属于纯培养,还需要进行分离、纯化及鉴定.使用比较多的分离纯化方法主要有平板划线分离法、稀释混合倒平板法、稀释摇管法、稀释涂布平板法、单细胞分离法、液体培养基分离法等.其中平板划线分离法、稀释混合倒平板法及稀释涂布平板法是最长用的三种分离纯化方法,不需要其他设备,而且分离的效果非常好.

2.4纯种培养技术

检验中,从一个器皿到另外一个培养容器中,经常采用接种环接种的方法进行,因为环境中存在着诸多的污染物,一旦器皿打开,环境中的污染物就有可能对器皿内的培养物或培养基造成污染,所以,进行菌种移接时,必须要在无菌环境下严格按照无菌操作进行.微生物实验及严重,接种以一项基本的操作技术,如果由于操作不规范造成污染,那么检验的结果也就失去意义,对下一环节的操作也会带来影响.由此可见,尽可能的降低工作环境中的杂菌污染外,还要对各种无菌操作技术熟练的掌握.

3结语

微生物在自然界中广泛的存在,在进行食品微生物检验中,必须要注重无菌操作,防止杂菌的混入,在进行分离、接种等操作时,也要严格采用无菌操作技术.实际上,人工无菌环境并非真正的无菌,这只是相对而言的,绝对的无菌是不存在的.所以,在检验的过程中为了不受其它微生物的污染,无菌操作就非常重要了,要求检验人员必须对无菌操作技术熟练的掌握.