HPLC法测定人工牛黄甲硝***胶囊中甲硝***的含量

【摘 要 】 目的 建立HPLC法测定人工牛黄甲硝唑胶囊中甲硝唑的含量.方法 采用依利特C18色谱柱,甲醇-水(20∶80) 为流动相,流速：1.0 ml/min；检测波长318 nm,柱温为30℃.结果 甲硝唑在0.025~0.150 mg/ml浓度范围内呈良好线性(r等于0.999 9),平均加样回收率(n等于6)为100.67%,RSD为0.33%.结论 该方法准确、可靠,与标准法比较,结果较为满意,可用于人工牛黄甲硝唑胶囊中甲硝唑的含量测定.

【关 键 词 】HPLC法；人工牛黄甲硝唑胶囊；甲硝唑；含量测定

Determination of metronidazole in galculus bovis and metronidazole capsules by HPLC

WU Wei-tao.Anyang Institute for Food and Drug Control,Anyang,Henan 455000,China

【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for determination of metronidazole in galculus bovis and metronidazole capsules.Methods Elite C18 column was used with a mobile phase posed of methanol-water (20∶80) at a flow rate of 1.0 ml/min.The detection welength was 318nm and the temperature of column was 30℃.Results The calibration curve of metronidazole was linear in the range of 0.025~0.150 mg/ml,r等于0.999 9.The erage recovery rate was 100.67%,RSD等于0.33%(n等于6).Conclusion This method is accurate,realiable and can be used for determination of metronidazole in galculus bovis and metronidazole capsules.

【Key words】HPLC；Galculus bovis and metronidazole capsules；Metronidazole；Content determination

人工牛黄甲硝唑胶囊为复方制剂,是临床常用的一种抗厌氧菌药,主要用于急性智齿冠周炎、局部牙槽脓肿、牙髓炎、根尖周炎等的治疗.国家标准［1］采用紫外分光光度法测定其含量,该方法影响结果因素较多.本文介绍的高效液相色谱法,采用优化的色谱条件,使甲硝唑的含量测定操作简便,专属性高,重现性好,可以替代紫外分光光度法.

1.材料

美国Waters高效液相色谱仪,包括2695型泵,PDA2996型二极管阵列检测器,全自动进样器,柱温箱；Mettler AE-240型电子天平； SECOMAM UVIKON XL型双光束扫描紫外/可见分光光度计.甲硝唑对照品(批号100191-200305,中国药品生物制品检定所)；人工牛黄甲硝唑胶囊(丹东市通远药业有限公司 批号20071111；中诺药业石家庄有限公司 批号08105701；大同市云华药业有限公司 批号080401).甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯.

2.方法与结果

2.1 色谱条件及系统适应性试验 色谱柱为依利特C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-水(20∶80),流速为1.0 ml/min,检测波长318 nm,柱温为30℃,进样量为10 μl.在此条件下,理论塔板数按甲硝唑峰计算不低于10 000,与其他峰的分离度符合要求.色谱见图1.

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取甲硝唑对照品25 mg,置100 ml量瓶中,用适量甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品贮备液.精密量取对照品贮备液5 ml,置25 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液.

2.2.2 样品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物,混合均匀,精密称取适量(约相当于甲硝唑25 mg),置100 ml量瓶中,用适量甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液5 ml,置25 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为样品溶液.

2.2.3 空白溶液测试 取流动相经0.45 μm微孔滤膜过滤后进样,结果表明,空白对测定无干扰.

2.3 线性关系 精密量取对照品贮备液2.5,5,7.5,10,15 ml,分别置25 ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,即得含甲硝唑0.025、0.050、0.075、0.100、0.150 mg/ml的对照品溶液,分别量取10 μl进样,测定峰面积,以浓度(C)为横坐标、峰面积(A)为纵坐标进行线性回归,得回归方程为A等于31 455 221.938 7×C-57 565.324 3,r等于0.999 9,线性范围为0.025~0.150 mg/ml.

2.4 精密度试验 在上述色谱条件下,取对照品溶液,重复进样6次.结果峰面积的RSD为0.16%.

2.5 重现性试验 精密称取样品(批号 08105701)5份,按照样品含量测定的方法操作,测得其平均含量RSD为0.09%.

2.6 加样回收试验 精密称取已知含量的样品(批号：08105701)细粉适量(约相当于甲硝唑25 mg)6份,置于100 ml量瓶中,加甲醇适量,振摇使溶解,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液5 ml,置于25 ml量瓶中,再分别精密加入“2.2.1”中的对照品贮备液5 ml,加流动相稀释至刻度,摇匀.照样品含量测定项下的方法测定加样回收率,测得甲硝唑的加样回收率(n等于6),结果见表1.

2.7 样品稳定性试验 选定的色谱条件下,每2 h进样一次,8 h内样品中甲硝唑含量测定的RSD为0.36%(n等于5),表明样品溶液在8 h内稳定.

2.8 样品含量测定 按“2.2.2”项下制备样品溶液,经0.45 μm微孔滤膜滤过后取10 μl进样测定,按外标法以峰面积计算.并与国家标准［1］规定的紫外分光光度法(UV法)测定的结果比较.结果见表2.

3.讨论

3.1 采用二极管阵列检测器,在318 nm波长处主峰有最大吸收,溶剂峰干扰较小,故选为测定波长.流动相的选择是参考文献［2］而确定的,配制简单,此流动相比例能使主峰在较短时间内出峰,且分离较好.

3.2 采用高效液相色谱法,操作简单易行,线性关系良好,结果准确可靠,与紫外分光光度法测定的结果无明显差异,可用于人工牛黄甲硝唑胶囊中甲硝唑的含量测定.