红霉素明胶微球含量的测定技术

【摘 要 】目的 建立红霉素明胶微球中红霉素含量的测定方法.方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为DIKMA C18色谱柱（5 μm,250 mm×4.6 mm）,流动相为0.1 mol/L磷酸二氢铵（三乙胺调节至pH6.5）乙腈（体积比67∶33）,流速1 mL/min；检测波长210 nm.结果 红霉素质量浓度在0.099 2～0.496 0 mg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系,r等于0.999 9；平均回收率为100.1%,RSD等于0.95%（n等于9）.结论 本文方法可用于红霉素明胶微球的含量检测.

【关 键 词 】红霉素明胶微球；测定技术

【中图分类号】R 927. 2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851（2014）2-0352-01

红霉素（erythromycin）是临床上应用广泛的抗生素,是治疗支原体肺炎、军团菌肺炎的首选药物,但在体内分布广泛,有效治疗浓度维持时间短,容易诱发耐药性,且有口服吸收不规则、肝毒性等不良反应.

红霉素微球是以可生物降解的明胶为载体,是本实验室通过正交试验优化制备的具有合适粒径的肺靶向性微球.中国药典（2005年版）中红霉素的含量测定采用微生物检定法,此法操作繁琐、费时、影响因素多、结果准确性差.文献报道红霉素及其在制剂中含量的检测方法有紫外分光光度法、高效液相法、高效毛细管电泳法等.

文章采用高效液相色谱法测定红霉素明胶微球含量,并对2种方法进行统计分析,检验2种方法的差异性.

1.仪器与试药

岛津LC10ATVP高效液相色谱仪（SHIMADZU COPRPORATION）,紫外SPD10Avp检测器（SHIMADZU COPRPORATION）,HW色谱工作站.pHS25pH计（上海精密科学仪器有限公司）,超声波清洗器（天津市考德斯科技有限公司）.

红霉素标准品（中国药品生物制品检定所,批号30307200215）,乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯,水为重蒸水.红霉素明胶微球（简称EMGMS,自制,批号：20060809、20060812、20060815、20060820、20060822、20060828）.

2.方法与结果

2.1 色谱条件, 色谱柱： DIKMA C18柱（5 μm,250 mm×4.6 mm）；流动相：0.1 mol/L磷酸二氢铵（三乙胺调节pH 6.5）乙腈（体积比67∶33）；流速1 mL/min；检测波长：210 nm.

2.2 溶液的配制 ：精密称取红霉素标准品49.6 mg置50 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,制成质量浓度为0.992 mg/mL的标准品溶液.

精密称取红霉素明胶微球172.3 mg（约相当于红霉素23 mg）,充分研磨,显微观察微球完全破坏后,置于容量瓶中加流动相至刻度,超声30 min,放冷,用流动相定容至刻度,摇匀,0.45 μm微孔滤膜过滤,制成供试品溶液.

精密称取空白明胶微球172.4 mg,充分研磨,按“供试品溶液”制备方法制成阴性对照溶液.

2.3 系统适应性及方法专属性试验：在选定的色谱条件下,分别注入红霉素标准品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液.红霉素拖尾因子为1.26、保留时间约13.1 min,理论塔板数按红霉素计算不低于1 000,与其他组分可基线分离,阴性样品不干扰样品测定.

2.4 标准曲线：分别精密量取标准品溶液1、2、3、4、5 mL置10 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀.分别取20 μL进样,记录色谱峰峰面积.以峰面积（A）为横坐标,质量浓度（ρ）为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程为：ρ等于0.3×10-4A+0.28×10-2,r等于0.999 9.结果表明红霉素的质量浓度在0.099 2～0.496 0 mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系.

2.5 稳定性试验：取供试品溶液在室温放置,分别于0、2、4、6、8、10 h进样,记录色谱峰峰面积,RSD为0.86%,表明样品溶液在10 h内稳定.

2.6 精密度试验：取对照品溶液,于10 h内不同时间重复进样5次,记录色谱峰峰面积,RSD为1.41%,表明精密度良好.

2.7 回收率试验 ：精密吸取已知浓度的红霉素明胶微球溶液9份,加入一定量的红霉素对照品,配制成高、中、低3种质量浓度的溶液,按“2.2”项方法制成供试液,进样测定,计算回收率,结果平均回收率为100.1%,RSD值为0.95%（n等于9）.

2.8 重复性试验：取同一批微球（批号：20060809）5份,按“2.2”项方法制成供试液,进样,记录色谱图,计算红霉素含量的RSD为1.2%,表明重复性良好.

2.9 样品的测定：取6批样品,按“2.2”项方法制成供试液,进样测定.并同时按紫外分光光度法进行检测.采用统计软件SAS9.0对2种方法的测定结果进行配对资料两样本均数t检验,统计分析结果可见,2种方法的测定结果差异无显著性（P等于0.85,P>0.05）.