肤痒颗粒成分检测技术

点赞:3751 浏览:12279 近期更新时间:2024-03-03 作者:网友分享原创网站原创

[摘 要]文章建立了肤痒颗粒的定性定量检测方法.

[关 键 词 ]肤痒颗粒 检验

中图分类号:R286 文献标识码:A 文章编号:1009-914X(2014)01-0275-01

肤痒颗粒收载于《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》,由红花、地肤子、白英、苍耳子、川芎5味中药组成,具有祛风活血、除湿止痒的功效,临床用于皮肤瘙痒症,湿疹,荨麻疹等瘙痒性皮肤病.原质量标准中只有2个理化鉴别,无薄层定性和含量测定方法.为了更好地控制制剂的内在质量,本试验对其定性、含量测定方法进行了探索.

一、仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱仪,G1314A紫外检测器.水为重蒸馏水,所用试剂均为分析纯.地肤子对照药材、齐墩果酸对照品、羟基红花素A(hydroxysafflor A,HYSA)对照品均由中国药品生物制品检定所提供.白英对照药材购自湖北省中药材公司,经湖北中医学院药学院鉴定教研室鉴定.肤痒颗粒由湖北东信药业有限公司提供.

二、方法与结果

1.定性鉴别

(1)地肤子的薄层色谱鉴别

取本品4.0g,研细,加乙醇40mL,超声处理5min,滤过,滤液加盐酸3.0 mL,加热回流2h,溶液放至室温后,滤过,滤液于水浴上挥去乙醇至干,残渣加水20mL使溶解,转移至分液漏斗中,以石油醚(60~90℃)萃取2次,每次15mL,合并石油醚提取液,置水浴上挥干,残渣加乙醇1mL溶解,作为供试品溶液.另取地肤子对照药材1g,加甲醇20mL,超声处理5min,滤过,加盐酸1.5mL,加热回流2h,放至室温后,滤过,于水浴上挥去乙醇至干,残渣加水10mL使溶解,溶液转移至分液漏斗中,以石油醚(60~90℃)萃取2次,每次10mL,合并石油醚提取液,置水浴上挥干,残渣加乙醇1mL溶解,作为对照药材溶液.再取齐墩果酸对照品适量,以乙醇溶解,制成每1mL含0.5mg的溶液,作为对照品溶液.照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取上述3种溶液各10μL,分别点于同一以0.5%羧纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以石油醚-三氯甲烷-丙酮(5∶2∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,于105℃加热至斑点显色清晰.供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点.经3批样品及阴性对照试验,结果阴性无干扰.

(2)白英的薄层色谱鉴别

取本品6.0g,加乙醇50mL,加热回流30min,放冷,滤过,滤液回收乙醇至干,残渣加水20mL使溶解,溶液转移至分液漏斗中,以乙酸乙酯萃取2次,每次15mL,合并乙酸乙酯提取液,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇1mL溶解,作为供试品溶液.取白英对照药材2.0g,加乙醇20mL,加热回流30min,放至室温,滤过,滤液置水浴上挥干,残渣加水10mL溶解,转移至分液漏斗中,以乙酸乙酯萃取2次,每次10mL,合并乙酸乙酯提取液,置水浴上挥干,残渣加甲醇2.0mL使溶解,作为对照药材溶液.照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取上述两种溶液各10μL,分别点于同一以0.5%羧纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯(5∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,于105℃加热至斑点显色清晰.供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点.经3批样品及阴性对照试验,结果阴性无干扰.

2.含量测定

(1)色谱条件及系统适应性试验

色谱柱:Alltima C18柱(5μm,250mm×4.6mm);流动相:甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(24∶6∶70);检测波长:403nm;柱温:25℃;流速:1.0 mL/min;理论塔板数按HYSA峰计算应不低于3000,阴性对照无干扰.在上述条件下,HYSA的保留时间约为11min(见图1).

(2)供试品溶液的制备

取本品颗粒1袋,精密称定,混匀,研碎,取约2g,精密称定,置25mL量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取本品水溶液5mL,置50mL量瓶中,以甲醇稀释至刻度,滤过,取续滤液25mL,置蒸发皿中挥去甲醇至干,残渣以25%的甲醇溶解并转移至5mL量瓶中,以25%的甲醇溶液稀释至刻度,摇匀,即得.


(3)对照品溶液的制备

取HYSA对照品适量,精密称定,加25%甲醇制成每1mL含0.13mg的溶液,即得.

(4)阴性对照液的制备

取处方量1/10的药材(缺红花),置1000mL烧瓶中,按生产工艺加水提取2次,合并提取液,静置8h,取上清液浓缩至适量体积,转移至100mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,取溶液2mL置25mL量瓶中,加入糊精0.5g,蔗糖粉1.5g,照供试品溶液制备方法制备,即得.

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(5)线性关系的考察

精密称取HYSA对照品6.40mg,置50mL量瓶中,加25%甲醇溶解并稀释至刻度,制成每1mL含HYSA0.128mg的溶液作为储备液.精密吸取储备液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL置1mL量瓶中,加25%甲醇稀释至刻度,制成每1mL分别含HYSA0.0128、0.0256、0.0512、0.0768、0.1024mg的溶液.精密吸取上述溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,测定.以峰面积为横坐标,HYSA的量(μg)为纵坐标,绘制标准曲线.线形回归方程为:Y等于-2165.1X23.921,r等于0.9998.HYSA在0.128~1.024μg范围内与峰面积呈良好的线性关系.

(6)精密度试验

取本品同一供试品溶液,重复进样5次,测定峰面积,结果HYSA峰面积积分值的相对标准偏差小于2.0%,表明仪器精密度良好.

(7)稳定性试验

取本品同一供试品溶液,分别于制备后放置0、1、2、4、8、12h,精密吸取20 μL,注入高效液相色谱仪,测定,计算HYSA含量,HYSA含量相对标准偏差小于2.0%,表明供试品溶液在制备后12h内测定基本稳定.

(8)重现性试验

精密称取本品同一批样品5份,按正文含量测定项下方法进行测定,结果HYSA含量标准偏差小于2.0%,表明本方法重现性良好.

(9)回收率试验

取已知含量的样品(含HYSA为0.6629mg/g)约1.0g,精密称定,置25mL量瓶中,分别精密加入HYSA对照品适量,按正文含量测定项下方法操作,计算回收率.本法平均回收率为99.58%,RSD<5.0%,表明回收率较好.

三、讨论

本研究参照《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》“肤痒冲剂”质量标准[1]拟定,采用TLC法对制剂中的地肤子、白英进行鉴别,选择的制样方法及展开剂具有分离度好、重复性好、专属性强的特点.

含量测定以红花中HYSA为指标成分,采用高效液相色谱法进行含量测定.其方法的建立,参照2005年版《中华人民共和国药典》(一部)红花项下含量测定的方法,根据本制剂的实际情况,将流动相调整为上述比例,结果表明,该方法简便,准确,专属性强,能客观地反映本品的内在质量.