环化蛋白的热稳定性提纲

论文摘 要 : 生物体绝大部分蛋白质在体内表达后往往以线性的形式折叠为功能性的蛋白质.在体内温和的（略）性链结构折叠来的蛋白质可以有效地行使其相应的生物学功能.随着蛋白质工程的发展,越来越多的酶类应用到工业生产中.为了追求更佳的反应速度或经济效益,工业应用的酶促反应与活体内的酶促反应环境是有差异的,不能及时更新损耗失活的酶,为了克服这些障碍,科（略）各种办法增加酶的稳定性,包括筛选耐热突变体、化学修饰、添加稳定剂、改变离子浓度以及包被技术等等.这些方法虽然能够提高蛋白质的热稳定性,但是盲（略）从一系列条件中筛得合适的方案才能实现其目标. M. Trabi和D. J. Craik等的研究指出,环化蛋白与线性蛋白相比,热稳定性高,蛋白质生物活性不受影响.因此,蛋白质的环化可能是增加蛋白质热稳定性的有效途径.基于这（略）利用革兰氏阳性细菌的转肽酶Sortase A环化基因工程生产的GFP(绿色荧光（略）e RNHase HII(Ape核糖核酸酶HII).基因工程生产的GFP和ApeRNHase HII两侧分别是甘氨酸四聚体GGGG和Sortase A特异识别序列LPXTG.环化蛋白的生物活性(分... Most proteins are（omitted）ich adopt folded structures conferring their biologic activties. With the development of protein engineering, more and more enzy（omitted）plied in industry. For the purpose of optimal velocity and economy, conditions for industrial （omitted）ns are usually different from those for enzymatic re（omitted） vivo so that their denatured proteins can not be supplemented by freshly synthesized ones. Thermostable enzymes would be a bette（omitted） to eliminate such obstacles. Researchers ...目录:摘 要 第3-5页 ABSTRACT 第5-6页 第1章 综述 第9-26页 ·,蛋白质的热稳定性 第9-15页 ·,蛋白质的热稳定性 第9-12页 ·,氨基酸组成对蛋白质热稳定性的影响 第10页 ·,分子内作用力对蛋白质热稳定的影响 第10-11页 ·,蛋白质的构型对蛋白质热稳定性的影响 第11-12页 ·,提高蛋白质热稳定性的方法 第12-15页 ·,突变技术 第12-13页 ·,化学修饰 第13页 ·,定向进化 第13页 ·,添加稳定剂 第13-14页 ·,翻译后修饰 第14页 ·,其它方法 第14-15页 ·,蛋白质的环化 第15-24页 ·,环化蛋白质的结构特点 第15-17页 ·,细菌中的环化蛋白 第15-16页 ·,植物中的环化蛋白 第16-17页 ·,哺乳动物中的环化蛋白 第17页 ·,蛋白质环化的方法 第17-21页 ·,天然化学连接 第17-18页 ·,内含肽环化 第18-21页 ·,顺式剪接反应 第19-20页 ·,反式剪接反应 第20页 ·,表达蛋白环化 第20-21页 ·,Sortase A 介导的环化反应 第21-24页 ·,转肽酶Sortase A 的特性 第21-23页 ·,Sortase A 介导的环化反应 第23-24页 展望 第24-26页 第2章 环化蛋白的热稳定研究 第26-57页 ·,引言 第26页 ·,材料和方法 第26-42页

·,材料 第26页 ·,试剂和仪器 第26-31页 ·,试剂及配方 第26-30页 ·,仪器 第30-31页 ·,方法 第31-42页 ·,感受态细胞的制备 第31页 ·,感受态细胞的转化 第31-32页 ·,突变pTWIN 载体 第32-34页 ·,构建pTWIN-M-GFP 表达亚克隆 第34-35页 ·,构建pTWIN-M-APE RNase HⅡ表达亚克隆 第35-37页 ·,非变性纯化GFP（几丁质柱） 第37-38页 ·,非变性纯化APE RNase HⅡ（几丁质柱.） 第38页 ·,非变性纯化Sortase A（Ni 柱） 第38-39页 ·,GFP 的环化反应 第39页 ·,APE RNase HⅡ的环化反应 第39页 ·,环化GFP 反应产物去除Sortase A 第39页 ·,环化APE RNase HⅡ反应产物去除Sortase A 第39-40页 ·,环化GFP 热稳定性检测 第40页 ·,环化APE RNase HⅡ的测活反应 第40页 ·,环化APE RNase HⅡ的在检测SNP 位点中的应用 第40-42页 ·,提取人基因组DNA 第40-41页 ·,PCR 扩增HLA（人类白细胞抗原）序列 第41页 ·,胶回收纯化HLA 片段 第41-42页 ·,环化APE RNase HⅡ对SNP 位点的检测 第42页 ·,结果与分析 第42-52页 ·,表达载体pTWIN 的突变 第42-43页 ·,相关蛋白质的纯化 第43-46页 ·,转肽酶Sortase A 的纯化 第43-45页 ·,绿色荧光蛋白GFP 的纯化 第45页 ·,核糖核酸酶APE RNase HⅡ的纯化 第45-46页 ·,绿色荧光蛋白GFP 的环化 第46-47页 ·,环化GFP 的热稳定性分析 第47-48页 ·,核糖核酸酶APE RNase HⅡ的环化 第48-49页 ·,环化APE RNase HⅡ的热稳定性分析 第49-50页 ·,环化APE RNase HⅡ的应用 第50-52页 ·,讨论 第52-55页 ·,转肽酶Sortase A 介导的蛋白质环化 第52-53页 ·,蛋白质的稳定性 第53-55页 ·,展望 第55-57页 参考文献 第57-63页 致谢 第63-64页 硕士期间发表专利 第64-67页 上海交通大学硕士学位论文答辩决议书 第67页