p16蛋白表达HPV检测在宫颈上皮内瘤变中的诊断意义

【摘 要】目的探讨p16和HPV检测在评估宫颈低度鳞状上皮内瘤变和高度鳞状上皮内瘤变分型中的价值.方法对宫颈低度鳞状上皮内瘤变和高度鳞状上皮内瘤变患者同时采用第2代杂交捕获（HC2）试验系统检测高危型HPV感染及检测p16蛋白的表达,比较宫颈低度鳞状上皮内瘤变和高度鳞状上皮内瘤变HPVDNA负荷量和p16蛋白表达的差异.结果宫颈低度鳞状上皮内瘤变中p16表达率为36.67%（11/30）,高度鳞状上皮内瘤变中表达率为100%（40/40）,二者比较差异有显著性（P<0.01）.30例低度鳞状上皮内瘤变中HC2检测阳性率为6333%（19/30）,高度鳞状上皮内瘤变中为97.5%（39/40）,二者比较差异有显著性（P<0.01）.HPV感染与p16表达呈正相关.结论宫颈上皮内瘤变中p16的强阳性染色和全层染色支持高度鳞状上皮内瘤变的诊断,高度鳞状上皮内瘤变与高危型HPV感染有关,对于宫颈高度上皮内瘤变的诊断,最好HPV与p16联合应用,以提高其病理诊断准确性.

【关 键 词】宫颈组织；状瘤病毒感染；HC2检测；p16蛋白表达

文章编号：1003-1383（2013）04-0513-03中图分类号：R737.33文献标识码：A

宫颈上皮内瘤变（cervicalintraepithelialneoplasia,CIN）是一组与浸润性宫颈癌密切相关的癌前病变的统称.由于CIN发展形成宫颈癌的病程较长,各类CIN分级的临床处理方法不一,低级别CIN患者一般采取定期随访,高级别CIN患者一般行宫颈Leep术.因而对CIN的准确病理学诊断尤为重要,但仅根据HE切片对于低度鳞状上皮内瘤样病变（CINⅠ）和高度上皮内瘤样病变（CINⅡ～Ⅲ级）之间的鉴别诊断,不同病理医师在诊断时常存在争议[1].本研究旨在探讨p16和高危型HPV感染

作者简介：缪卫娟（1975-）,女,江苏省江阴市人,医师.研究方向：妇科病理.在鉴别二者中的意义.

对象与方法1.研究对象回顾性选择2011年6月～2012年5月在江阴市妇幼保健院及常州市肿瘤医院妇科门诊就诊的宫颈环切组织患者,经常规制片、HE染色,由2位有经验的病理医生严格统一诊断,共挑选宫颈上皮内瘤变（CIN）患者70例,其中低级别上皮内瘤变（CINⅠ级）患者30例,高级别上皮内瘤变（包括CINⅡ级、CINⅢ级及原位癌）患者40例.研究对象年龄22～50岁,均为非妊娠期,非月经期.

2.方法

（1）HPVDNA检测：在受检者宫颈管及宫颈外口刷取标本,用美国Digene公司第二代杂交捕获试验（hybridcapture,HC2）行高危型人状瘤病毒（HPVDNA）的测定,测定HPVDNA含量,判断结果分为阳性和阴性.检测值<1.0pg/ml为阴性,≥1.0pg/ml为阳性.

（2）免疫组化检测：采用EnVision二步法.p16鼠单克隆抗体购自北京中杉生物技术有限公司,以已知阳性标本作为阳性对照,以PBS代替一抗作为阴性对照.p16表达定位于细胞核或细胞质,判读结果参照张建兰等标准[2]：阴性（-）：阳性细胞数<5%；弱阳性（+）：阳性细胞数为5%～24%；阳性（++）：阳性细胞数为25%～50%；强阳性（+++）：弥散的细胞染色,阳性细胞数>50%.

3.统计学方法统计分析采用SPSS13.0统计软件.系统相关资料采用χ2检验比较两种方法是否存在差异,P<0.05为差异有显著性.

结果1.宫颈病变中HPV表达相关性70例标本中HC2的检出率为82.86%（58/70）,其中30例低级别CIN患者中HC2检测阳性率为63.33%（19/30）,高级别CIN中检测阳性率为97.5%（39/40）,二者比较差异有显著性（χ2等于14.09,P<0.01）.见表1.

2.宫颈病变中p16表达相关性70例标本中,p16的表达率为72.86%（51/70）.其中低级别CIN中p16表达率为36.67%（11/30）,高级别CIN表达率为100%（40/40）,二者比较差异有显著性（χ2等于34.77,P<0.01）.低级别组p16表达呈局灶性,散在弱阳性.高级别组p16表达主要呈全层弥漫性,强阳性,且p16表达类型逐渐从弱阳性转变为强阳性.见表2.

3.HPV与p16的关系本研究中高级别CIN中39例HPV感染者全部表达p16（+）,低级别CIN中19例HPV感染者有10例p16（+）,二者比较差异有显著性（χ2等于18.40,P<0.01）.表明高危型HPV感染与p16呈正相关,同时还提示：随着CIN级别进展,HPV的检出率和p16蛋白的表达也同时升高.

讨论目前大量研究已经证明高危型HPV生殖道持续感染是引起CIN及宫颈癌的必要条件.HPV感染是一种通过性生活传播的疾病,性活跃妇女一生感染高危HPV的机会高于70%,且大多为一过性,通常感染在数月至两年内消退,只有5%～10%的高危HPV可表现为持续感染状态.从病毒感染到宫颈癌的发生需要十几年,而癌前病变期是可逆转的,因此高危型HPV检测正日益受到临床医生和患者的重视.HC2是目前唯一经美国FDA及中国SDA认证的,允许用于临床高危型HPVDNA的检测方法,目前HPVDNA含量与宫颈病变进展的关系还处于争论之中,多数文献报道并无相关性[3,4].本结果显示低级别CIN中高危型HPV检测的阳性率为63.33%（19/30）,高级别CIN中高危型HPV检测的阳性率为97.5%（39/40）,两者比较差异有显著性,提示宫颈HPVDNA含量与宫颈病变程度有一定相关性.p16在宫颈上皮内瘤变（CIN）的发生发展机制中起调控作用,p16基因是细胞周期中作用于细胞分裂周期关键酶CDK4的抑制因子,它可阻止细胞从Gl期进入S期,从而抑制细胞增殖.当p16基因突变致结构和功能缺失时,可刺激细胞旺盛分裂增殖,引起细胞的非典型增生,甚至癌变.因此从理论上推测,p16检测对宫颈病变进展更具特异性.本结果显示,p16蛋白表达在低级别CIN中的阳性率为36.67%（11/30）,且p16表达呈局灶性,散在弱阳性,在高级别CIN中的阳性率为100%（40/40）,p16表达主要呈全层弥漫性,强阳性,且p16表达类型逐渐从弱阳性转变为强阳性,二者差异有显著性,与文献报道一致[5].提示宫颈上皮中p16的强阳性染色和全层染色高度支持高级别CIN的诊断,p16检测可作为宫颈上皮内瘤变之间的鉴别诊断标记物,p16蛋白在宫颈组织学中的表达与宫颈组织学疾病严重程度呈正相关,也认为可根据p16免疫染况为宫颈组织学疾病严重程度提供诊断依据.

由于CIN患者的最佳处置与CIN的关系密切,低级别CIN患者一般采用定期随访,高级别CIN患者一般采用Leep术,因而对CIN的准确病理学诊断尤为重要.对组织中是否存在CIN及判断CIN的级别,仅根据HE切片,不同病理医师在诊断时常存在争议.如果在组织学的基础上再寻找有效的预测指标,从数量和性质两个角度对所查病变的特征做出评估,则更具有诊断价值.本研究结果表明,随着宫颈CIN病变加重,HPV检出率逐渐升高,p16蛋白表达亦逐渐升高,且两者呈正相关,故在CIN诊断中高危HPV检测与p16联合应用可起到互相补充的作用.联合运用高危HPV检测及p16蛋白检测,有可能对CIN的分级有帮助,具有一定的临床应用价值.