中医不同治法对心肌缺血再灌注损伤大鼠炎症相关细胞因子的影响

摘 要：目的观察中医不同治法对高脂血症心肌缺血再灌注损伤（MI/RI）大鼠炎症相关细胞因子含量的影响,探讨其对MI/RI的拮抗作用.方法60只雄性SD大鼠随机分为检测手术组、模型组、祛痰宽胸组、活血化瘀组及痰瘀同治组.除检测手术组外,其余大鼠予高脂饲料喂养,采用可逆性冠脉左前降支结扎缺血30min再灌注2h复制MI/RI模型,检测再灌注后各组大鼠血清总胆固醇（CHO）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）以及细胞间黏附分子（ICAM）-1、肿瘤坏死因-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-10含量.结果与模型组比较,各治疗组血清CHO、TG、HDL-C、LDL-C含量降低（P<0.05,P<0.01）,活血化瘀组血清ICAM-1含量降低（P<0.05）,痰瘀同治组可抑制ICAM-1、TNF-α表达（P<0.05）,祛痰宽胸组作用不显著（P>0.05）.结论活血化瘀法及痰瘀同治法对大鼠MI/RI有显著保护作用,其机理可能与调控血脂、抑制炎症因子表达,从而减轻炎症反应有关.

中图分类号：R242.2；R285.5文献标识码：A文章编号：1005-5304（2013）01-0040-03

关 键 词：心肌缺血再灌注损伤；祛痰宽胸；活血化瘀；痰瘀同治；炎症反应；大鼠

结构破坏,引起细胞死亡,导致梗死范围扩大,造成心功能的进一步损害.随着动脉搭桥术、溶栓术等疗法的应用和推广,MI/RI已成为当今急性心肌缺血再灌注治疗时代不能实现心肌“有效再灌注”的一个主要原因和障碍.MI/RI病因复杂,与多种因素有关,其中炎症反应与再灌注损伤关系密切[1-2].近年研究表明,中药能通过抑制炎症细胞的趋化与浸润,调节细胞因子的合成与分泌,减轻炎症损伤,发挥心肌保护作用[3].本研究采用高脂大鼠制备MI/RI模型,从炎症反应角度探讨祛痰宽胸、活血化瘀、痰瘀同治等不同中医治法对MI/RI的拮抗作用,以期为临床治疗缺血性心脏病提供参考依据.

1材料与方法

1.1实验动物

雄性SD大鼠60只,体质量（315±20）g,北京维通利华实验动物技术有限公司提供,许可证号：SCXK（京）2012-0001.

1.2主要试剂与药物

总胆固醇（CHO）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂盒均购自北京中生北控生物科技有限公司,批号分别为120621、120931、120502、120521；细胞间黏附分子（ICAM）-1、肿瘤坏死因-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-10ELISA试剂盒,英国Abcam公司产品,购自北京中原领先科技有限公司,批号分别为GR101667-1、k120727、GR95720-1.

祛痰宽胸法、活血化瘀法及痰瘀同治法代表方剂分别选用瓜蒌薤白半夏汤（瓜蒌24g,薤白9g,清半夏12g,白酒24L）、血府逐瘀汤（当归9g,生地黄9g,桃仁12g,红花9g,枳壳6g,赤芍6g,柴胡3g,桔梗5g,川芎5g,牛膝9g,甘草3g）及痰瘀同治方（前两方合方）.三方分别浓缩成含原药材量1.3、2.2、2.15g/mL的水煎液,中药材购自亳州市芳益堂药业有限责任公司.药物剂量换算按体质量70kg成人每日1剂用量换算出大鼠1日用量（相当于人用剂量的20倍）.

1.3分组

将60只大鼠随机分5组,每组12只,分别为检测手术组、模型组、祛痰宽胸组、活血化瘀组及痰瘀同治组.检测手术组动物常规饲养,其余各组给予高脂饲料（74%基础饲料、1%胆固醇、10%蛋黄粉和15%猪油,购自北京科澳协力饲料有限公司）.

1.4造模与给药

各组分别按1mL/100g量给予生理盐水或药物灌胃,每日1次,连续给药8周.末次给药2h后用于实验.

取材前,腹腔注射1%钠（5mL/kg）,麻醉后仰卧位固定四肢及头部.记录Ⅱ导心电图.颈部、胸前手术野备皮,切开气管,连接动物呼吸机（呼吸频率70次/min,吸呼比1∶2,潮气量9mL/kg）.自左侧第3～4肋间剪开皮肤,钝性分离肌肉组织,打开胸腔,剪开心包膜,于左心耳与肺动脉圆锥之间找出冠状动脉左前降支,并以5-0号丝线结扎分支起点外约1～2mm,（在丝线与心肌间放一根约1cm长细棉绳）,此时缺血心肌壁呈现发绀、膨出,同时记录心电图,以标准肢导联Ⅱ导联ST段弓背上抬、T波高耸,显示心肌缺血形成.30min后松开结扎,使缺血冠脉再灌注,关闭胸腔,再灌注120min,心电图示ST段回落1/2以上.结扎前心电图不正常,或未到观察终点而死亡以及造模不成功者剔除.

1.5标本采集与检测

实验结束后,腹主动脉取血5mL,3000r/min离心10min,分离血清,全自动生化仪检测CHO、TG、LDL-C及HDL-C,ELISA法按试剂盒说明检测ICAM-1、TNF-α、IL-10.

1.6统计学方法

采用SPSS11.5软件进行统计分析.计量资料以―x±s表示,多组间比较采用单因素方差分析,满足方差齐性时的两两比较采用LSD-t法,不满足方差齐性时的两两比较采用Tamhane'sT2法,P<0.05为差异有统计学意义.

2结果（见表1、表2）

3讨论

现代医学认为,MI/RI是一个固有免疫机制启动的炎性反应,包括多种前炎性基因（趋化因子、细胞因子和细胞因子受体）表达的上调.研究表明,在缺MI/RI中发生了细胞因子瀑布式的激活[4].中药可通过多层次、多途径、多靶点综合作用于MI/RI后炎症反应的多个病理环节,有效阻断炎症级联反应的瀑布效应,保护缺血心肌,发挥独特优势[5].中医理论认为,MI/RI的病位在心,涉及血脉,属于“胸痹”、“心悸”、“真心痛”等范畴,其病机多为本虚标实,本虚乃心之阴阳气血不足,标实由外因引起的气滞、血瘀、痰阻等.本研究即从其基本病机着手,采用相应代表方剂为干预措施,观察了不同治法对MI/RI炎症反应的防治效果.高脂血症是导致动脉粥样硬化、冠状动脉梗阻或狭窄,引起冠心病及心肌梗死的独立危险因素之一.有研究显示,大鼠心功能损伤程度及炎症因子水平与血脂升高有密切联系[6].实验结果表明,各治疗组对大鼠血脂异常增高有明显的抑制作用,在此基础上,本研究进一步观察了其对再灌注损伤后炎症反应的影响.

TNF-α是MI/RI早期巨噬细胞和心肌组织所产生的炎症细胞因子,能诱导血管炎症反应,引起内皮功能障碍[7-8].TNF-α可使炎症局部血管通透性增加,刺激血管内皮细胞和多形核白细胞（PMN）表达内皮白细胞黏附分子（ELAM）和ICAM,促进PMN聚集,导致PMN释放活性氧和蛋白水解酶等物质,引起心肌微血管的阻塞和心肌损伤,加重缺血再灌注损伤程度[9].ICAM-1是免疫球蛋白超家族的成员,其主要功能是通过与淋巴细胞功能相关抗原-1（LFA-1）和巨噬细胞分化相关抗原-1（Mac-1）结合而介导中性粒细胞与血管内皮细胞的黏附.心肌缺血再灌注时,缺血的细胞产生大量的促炎介质如脂多糖、TNF-α、补体C5a、细胞因子IL-6等；在炎症介质作用下,内皮细胞及白细胞表达活性提高,两种细胞相继被激活,细胞表面有多种黏附分子表达,并能介导炎症和免疫反应[10].本实验结果显示,MI/RI后大鼠血清TNF-α、ICAM-1含量都明显增多,提示炎症反应增强.活血化瘀组可降低ICAM-1含量,而痰瘀同治组能够同时抑制TNF-α及ICAM-1高表达,与模型组比较,差异有统计学意义,综合能力优于其他治疗组,提示其能通过降低炎症因子水平,防止炎症因子在缺血区血管中黏附、聚集导致内皮损伤,从而减轻炎症反应.

IL-10由各种炎性细胞,特别是巨噬细胞产生,一方面可抑制炎性细胞（如单核细胞、淋巴细胞等）的黏附和浸润,另一方面可抑制单核/巨噬细胞合成、释放前炎性细胞因子,是体内合成的重要抗炎细胞因子[11].在心血管系统中,IL-10是缺血再灌注早期就已产生的一种抗炎介质,对MI/RI具有保护作用.实验结果表明,各治疗组能不同程度地升高血清IL-10含量,但均不显著.综合整体实验结果来看,可以认为活血化瘀法及痰瘀同治法对MI/RI炎症反应有显著的抑制作用,可能是通过控制血脂、抑制炎症相关细胞因子的释放而实现的.

[10]JordanJE,ZhaoZQ,Vinten,eta1.Cardonmonoxidehasanti-inflammatoryeffectsinvolvingthemitogen-activatedproteinkinasepathway[J].CardiovascRes,2006,43（4）：860-878.

[11]陈琪,李胜涛,陈志伟.内关穴位注射香丹注射液对大鼠心肌缺血中炎性因子IL-10、IL-18的影响[J].辽宁中医药大学学报,2010,12（10）：200-202.

（收稿日期：2012-11-19,编辑：华强）