对国产化学发光法孕酮检测试剂的评价

摘 要目的：对国产化学发光法孕酮检测试剂进行评价.方法：选取标本40份,检测国产试剂的灵敏度、标准曲线线线性、特异性、重复性、稀释回收率及与进口化学发光孕酮检测试剂的进行比较并综合分析.结果：国产试剂检测的灵敏度0.09ng/ml,标准曲线线性0.9990,与孕酮类似物睾酮(20ng/ml)、雌二醇(1000pg/ml)无交叉反应性,3次测定标本的变异＜10%,稀释高值标本的回收率85%～110%,与进口化学发光试剂的相关性良好,相关系数r2等于0.9790,P＜0.001.结论：被评价化学发光孕酮检测试剂结果准确、可靠.

关 键 词化学发光法孕酮试剂

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.27.186

孕酮(4-孕烯-3,20-二酮)是一个C21类固醇激素,分子量314.5.孕酮是人体内分泌的一种重要的性激素,未孕女性的孕酮主要由黄体分泌,孕妇则主要由胎盘分泌.男女的肾上腺皮质及男性的睾丸也分泌少量孕酮［1］.孕酮的异常分泌与经前期紧张、子宫内膜的不规则脱落、痛经及黄体功能不全有关.血清孕酮浓度的测定在临床上用于判断有无排卵及未孕女性的黄体功能,对鉴别诊断宫内早早孕、先兆流产、难免流产及异位妊娠有重要价值［2］,对判断男性生殖功能状态也有一定作用.郑州安图生物生产的化学发光孕酮检测试剂,采用竞争抑制法,在固相微孔板上包被羊抗鼠IgG的二抗,操作时将特异性抗孕酮抗体溶液、HRP标记的孕酮溶液和血清样本一起加入到微孔板内,室温孵育60分钟后,经过清洗,加入化学发光底物,在检测仪上进行读数,检测信号值与血清标本中的孕酮含量成反比.本文对该试剂的灵敏度、标准曲线线性、特异性、重复性、稀释准确性进行检测评价并与进口贝克曼化学发光孕酮检测试剂进行比较并综合分析［3］.现将试验结果报告如下.

资料与方法

随机抽样送检血清标本40份,-20℃保存.

仪器：LUMO化学发光仪、IWO洗板机,DXI800化学发光仪.

试剂：孕酮发光定量检测试剂盒,DXI800配套试剂.

方法：灵敏度计算,测定20份0值标准品,计算测定发光信号值的(x±S),灵敏度等于(x±S)回算的浓度值；特异性计算,测定睾酮(20ng/ml)、雌二醇(1000pg/ml),回算浓度值；重复性,3次测定同3份血清标本,计算其3次测定结果的变异系数CV%；稀释回收率,用稀释液稀释两份高值标本,回收率等于实测值/理论值×100%.操作严格按照试剂说明书进行,试验标本收集后,-20℃保存,室温复溶后统一测定.

统计学处理：采用SPSS10.0统计分析软件进行统计分析.

结果

灵敏度、标准曲线线性：国产孕酮检测试剂的灵敏度较高,满足临床需求,用logit-log的曲线拟合方式对标准曲线进行线性拟合R20.995以上.

特异性：特异性即交叉反应性,睾酮含量20ng/ml,雌二醇含量1000pg/ml时孕酮测定结果为0.10ng/ml和0.15ng/ml,相当于与20ng/ml的睾酮和1000pg/ml的雌二醇交无交叉反应.

重复性：3份血清标本,进行3次测定,3份标本的变异系数分别为8.64%、4.57%、5.60%,均＜10%.

稀释回收率：把两份血清标本用稀释液倍比稀释后,测定其孕酮含量,各稀释比的测定稀释回收率85%～110%.

被评价试剂与对比试剂检测结果的比较：对随机抽样的40份标本用两种试剂进行同时测定标本中孕酮含量,并将两者测定结果进行统计学分析,r2等于0.9790,直线回归方程y等于1.0067x+0.2636,P＜0.001,两者呈显著相关性.

讨论

临床检测血清孕酮的方法有放射免疫法、酶联免疫法、化学发光法、电化学发光法、磁微粒化学发光法等.酶联免疫法由于其灵敏度较低,已基本不再应用.放射免疫法,存在着放射性核素污染,试剂保存期短等缺点,目前也较少有医院使用.占主流的是化学发光法,相应试剂和仪器主要有国产和进口贝克曼、雅培、罗氏等,进口试剂昂贵,本文旨在对国产试剂进行评价,即能够有较好的性能,满足临床应用,又有较低廉的.本次评价的国产化学发光试剂,是一种基于微孔板式化学发光方法.结果显示,被评价的国产试剂的灵敏度0.09ng/ml,与20ng/ml的睾酮、1000pg/ml的雌二醇无交叉,三份标本的重复测定结果变异系数分别为8.64%、4.57%、5.60%,均＜10%,稀释回收率85%～110%,与进口对比试剂的相关系数r2等于0.9790,P＜0.001,表明该国产试剂在灵敏度、特异性、重复性、稀释回收率等指标上能满足临床测定的要求,与进口对比试剂具有显著的相关性和符合性.国产化学发光孕酮检测试剂既能满足临床需要又能符合国情降低患者负担,在本院使用过程中,比较稳定,值得进一步推广使用.