大鼠血浆中双嘧达莫的反相高效液相色谱法检测

点赞:12224 浏览:47771 近期更新时间:2024-01-29 作者:网友分享原创网站原创

【摘 要】目的:建立大鼠血浆中双嘧达莫的检测方法.方法采用RP-HPLC法测定大鼠血浆中的药物浓度,色谱柱为LichrospherC18(4.6×250mm,5μm),流动相为甲醇-水-冰乙酸(75∶25∶0.5v/v).结果在0.1~8mg/L-1范围内双嘧达莫峰面积与浓度线性关系良好(r等于0.9995),最低检测限为0.01mg/L-1,绝对回收率为85.8%~94.3%,准确度为94.9%~104.7%,日内RSD为2.2%~6.6%,日间RSD为5.9%~11.4%.结论本测定方法灵敏、准确、简便,适合于双嘧达莫的药代动力学研究.

关 键 词:双嘧达莫;血浆;RP-HPLC

DeterminationofdipyridamoleinratsplaabyRP-HPLC

AbstractAIMTodevelopasimple,sensitiveandrapidmethodforthedeterminationofdipyridamoleinratsplaa.METHODTheplaaconcentrationofdipyridamolewasdeterminedbyRP-HPLCmethod,theanalysisinvolveda250mm×4.6mmcolumnpackedwithC18(5um),themobilephaseconsistedofmethylalcohol-water-glacialaceticacid(75:25:0.5)RESULTAgoodlinearitywasobtainedintherangeof0.1~8mg-1(r等于0.9995),therecoverywasbetween85.8%~94.3%,theaccuracywasbetween94.9%~104.7%,andtheminimaldetectableconcentrationinhumanplaawas0.01mg-1.theintra-dayRSDis2.2%~6.6%andtheinter-dayRSDis5.9%~11.4%.CONCLUSIONTheresultdemonstratedthatthemethodwassensitive,accurateandsimpleforthedeterminationofdipyridamoleinratsplaa,itwassuitableforthepharmacokiicsstudyofdipyridamole.

Keywordsdipyridamole,plaa,RP-HPLC

双嘧达莫(Dipyridamole),又称潘生丁(Persantin),对冠状血管有较强的扩张作用,可显著增加冠脉流量,能抑制血小板聚集.临床主要用于血栓栓塞性疾病及缺血性心脏病[1,2].最近几年潘生丁的临床应用日趋拓宽,文献报道其对血栓栓塞性脉管炎、肾病综合症和上呼吸道感染等疾病均有良好的效果[3].潘生丁的

血药浓度测定及临床药代动力学研究文献报道较少,本文建立了大鼠血浆中潘生丁的反相高效液相色谱测定法,可广泛用于治疗药物检测及临床药代动力学研究.

1试药与仪器

1.1仪器

日本岛津LC-10A高效液相色谱仪,N2000型色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所),TGL-16B高速离心机(上海安亭科学仪器厂),XW-80A旋涡混合器(上海精科有限公司).

1.2药品与试剂

潘生丁对照品由中国药品生物制品鉴定所提供,甲醇为色谱纯(山东禹王实业有限公司禹城化工厂),已腈为色谱纯(山东禹王实业有限公司),自制纯净水.

1.3动物

SD大鼠,200~240g,由青海地方病研究所动物中心提供.

2方法

2.1色谱条件

色谱柱:LichrospherC18(4.6×250mm,5μm),流动相:甲醇-水-冰乙酸-三乙胺(75∶25∶0.5v/v),流速:1mLmin-1,检测波长:283nm,进样量:20μL.

2.2对照品溶液配制

精密称取潘生丁10mg置10mL容量瓶中,加入甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得1mg.mL-1潘生丁的储备液.以此标准储备液稀释配制成各种浓度的对照品溶液.

2.3样品处理

取大鼠血浆样品0.5mL于离心管中,加入0.5mL的已腈,涡漩1min,16000rmin-1离心10min,取上清液20uL,用HPLC法进行测定.

2.4色谱行为

在本实验条件下,潘生丁的保留时间约为6.3min,此峰与杂质分离良好,色谱图见图1.

2.5标准曲线制备及最低检测浓度测定

取离心管数支,分别加入大鼠空白血浆0.5mL与潘生丁对照品溶液适量,配成浓度为0.1,0.2,0.5,1,2,4,6,8mgL-1的标准血浆样品,涡漩混匀后按“样品处理”项下操作,每种浓度做5份,记录峰面积.以潘生丁峰面积A对浓度C进行回归计算,得回归方程:A=19773×C-2107,r=0.9995.按上述条件测得大鼠血浆中潘生丁最低检测限为0.01mgL-1.

2.6精密度试验

按“标准曲线制备”项下操作,配制浓度为0.1,2,8mgL-1的潘生丁标准血浆样品,按“样品处理”项下操作,测得低、中、高三种浓度的日内与日间精密度分别为6.6%、4.5%、2.6%和11.4%、7.6%、5.9%.

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2.7回收率试验

取离心管数支,分别加入潘生丁对照品溶液适量,以甲醇配成含潘生丁分别为0.1,2,8mgL-1的溶液,每份0.5mL,以氮气吹干后,用0.65mL流动相溶解残渣,精密吸取20uL进样分析,记录色谱图得样品峰面积As.另取离心管数支,分别精密加入不同量的潘生丁对照品溶液及0.5mL空白血浆,涡旋1min,配成含潘生丁0.1,2,8mgL-1的血浆样品,每种浓度各做5份样品,按“样品处理”项下操作,记录色谱图得样品峰面积Ax.上述Ax和As的比值即为潘生丁的绝对回收率(R%).结果测得低、中、高三种浓度的回收率分别为85.8%、90.1%和94.3%.

2.8准确度试验

将前述日间精密度中0.1,2,8mgL-1系列浓度的峰面积As代入前述标准曲线方程,计算所得浓度和加入浓度的比值即为准确度.结果测得低、中、高三种浓度的准确度分别为94.9%、95.5%和104.7%.

3讨论

文献报道杨鹏晖等[4]用荧光分光光度法测定了潘生丁的血清浓度,灵敏度虽较高,但干扰因素多且用提取法处理血清样品,操作繁琐,不宜用于药代动力学的研究,本文建立的大鼠血浆中潘生丁的RP-HPLC测定方法,简便,准确,灵敏度高.

范建宏等[5]采用甲醇-水-冰乙酸-三乙胺作为流动相,虽然所得色谱图峰形好,干扰少,但经作者反复试验,流动相中加入三乙胺可明显降低样品回收率.本文所建方法流动相为甲醇-水-冰乙酸混合溶液,在此流动相条件下,基线平稳,干扰少,样品分离良好.

考察分析了已腈、甲醇和乙醇三种沉淀试剂,结果表明甲醇和乙醇沉淀蛋白不完全,样品离心后上清液仍较浑浊且灵敏度偏低,已腈沉淀蛋白的能力较强,故最终选择已腈为沉淀试剂.根据文献报道,当已腈与血浆的体积比为2比1时,已腈沉淀蛋白的能力最强[6],但实验过程中发现,等体积的已腈就可满足实验要求,故确定已腈与血浆的体积比为1比1.


本实验干扰少,灵敏度高,操作简便,适合于潘生丁的药代动力学研究.