网站原创【摘 要】目的对金标法与酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙肝表面抗原(HBsAg)进行方法学比较.方法对1024份健康体检血清标本同时用金标法和ELISA检测HBsAg,以ELISA为标准,对金标法的灵敏度、特异性进行评价.结果以ELISA为标准,1024份血清中金标法有5份检测阴性,9份检测阳性,灵敏度为99.51％,特异度为99.12％,准确度为98.63％.结论ELISA步骤多,时间长,特异性强,灵敏度高,适合批量检测.金标法快速简便,单份检测,无需任何仪器,适合急诊检测,但灵敏度、特异性稍差,特别是针对小三阳和乙肝携带者有漏诊可能.因此实验室应根据需要并结合工作情况选用.
【关 键 词】乙肝表面抗原；金标法；酶联免疫吸附法
乙型肝炎是目前流行最广泛、危害最严重的病毒性肝炎之一,我国为乙型肝炎病毒感染的高流行区,正常人群的乙肝表面抗原(HBsAg)携带率一般为10％～15.目前检测HBsAg的方法以酶联免疫吸附法(ELISA)为代表,该法以其操作简便、快速、灵敏、准确、重复性好、无放射污染等特点被广泛使用；金标法(Goldimmnnochromatog-raphy,GICA)是在ELISA基础上发展起来的一种检测技术,由于其具有操作简便、快捷、可单份检测、便于保存、不需特殊设备等优点,也广泛应用于HBsAg的初筛.本文对两种方法检测结果进行比较,探讨其差异性.
| 有关论文范文主题研究: | 关于统计学的论文范文数据库 | 大学生适用: | 硕士论文、大学毕业论文 |
|---|---|---|---|
| 相关参考文献下载数量: | 34 | 写作解决问题: | 写作参考 |
| 毕业论文开题报告: | 论文任务书、论文摘要 | 职称论文适用: | 论文发表、高级职称 |
| 所属大学生专业类别: | 写作参考 | 论文题目推荐度: | 免费选题 |
1 材料与方法
1.1标本来源来自2009年4～8月北京军区北戴河疗养院体检人员、门诊患者及疗养人员1024例,其中男615例,女409例.抽取静脉血3mL,标本静置后离心取血清.
1.2方法
1.2.1金标法严格按照使用说明书的要求操作,在层析扩散正常的情况下,质控区出现1条紫红色条带,测试区未出现紫红色条带为阴性；质控区和测试区均出现紫红色条带为阳性；仅测试区出现,质控区未出现紫红色条带,结果无效.HBsAg金标试纸条加样后15～20min观察结果,30min后出现的反应线视为无效.
1.2.2ELISA采用双抗体夹心法原理在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗体(HBsAb),配以酶标记抗体(HBsAb-HRP)及TMB显色剂等其他试剂,检测人血清或血浆中的HBsAg.严格按照说明书进行操作.
2 试剂与仪器
金标法快速测试条由浙江杭州艾康生物技术有限公司提供(批号：200805164／d),ELISA试剂盒由北京万泰生物药业股份有限公司提供(批号：X20090101),酶标仪：Ray-m6000,洗板机：Rayt03000,恒温箱：WMZK-02,加样器：M148023.
3 结果
金标法与ELISA检测HBsAg的比较,在1024份标本中ELISA检出HBsAg阳性92份,阳性率为8.98％；金标法有5份检测阴性,9份检测阳性,阳性率为9.37％,灵敏度为94.56％,特异度为99.03％.两法结果经配对计数资料的x2检验,x2等于0.0469,结果显示两种方法测定的HBsAg结果间差异无统计学意义,P>0.05.但漏检率仍为5.4％,误差率为0.88％,准确度为98.63％(表1).
4 讨论
用抗HBsAg多克隆抗体包被硝酸纤维索膜,配以红色乳胶标记的抗(HBsAg)单克隆抗体HBsAb,应用双抗体夹心法原理,定性检测血清或血浆中HBsAg.
本实验结果表明,金标法与ELISA法的灵敏度有差异,金标法的灵敏度稍低于ELISA法.目前,国产的HBsAg胶体金试纸条检测灵敏度已达到1ng／mL,而ELISA试剂的灵敏度可达0.5ng／mL,这可能是造成ELISA法检测弱阳性标本金标法检测阴性的主要原因,还有金标法存在的一个重要的问题就是层析的速度,如果速度过快,HBsAg未能与试纸条上的HBsAb结合,就越过了检测线,弱阳性样本还未显示,这也可能导致漏检.国内作者报道,由于金标法易受环境、湿度、反应时间及加样量的影响,对于低滴度HBsAg感染者极易造成漏检.ELISA法检测HBsAg以灵敏度高、特异性强、可进行定量和半定量测定尤为突出,重复性好,可进行批量检测,但操作步骤相对繁琐,试剂实际要求严格,影响因素多.因此实验室要结合工作情况合理选用试验方法.