血清P53蛋白与肿瘤标志物检测辅助诊断消化系统肿瘤转移的价值

摘 要　目的通过比较研究证明血清P53蛋白与肿瘤标志物联合检测对于辅助诊断消化系统肿瘤转移优于单项检测.方法55例经手术及病理确诊的消化系统恶性肿瘤患者分为转移组(19例)、未转移组(36例).另有14例健康对照者.采用酶联免疫吸附测定法检测血清P53蛋白水平,并联合检测血清CEA、CA19-9、CA242和CA72-4.结果转移组血清P53蛋白水平高于未转移组(P<0.05)；转移组和未转移组血清P53蛋白水平均高于健康对照组(P<0.05).P53、CA19-9、CA72-4为转移危险因素,诊断转移灵敏度分别为84.2％、73.7％、47.4％；特异度分别为100％、77.8％、97.2％.P53、CA19-9,平行试验灵敏度为100.0％,特异度为61.1％.结论P53是判断消化系统肿瘤转移有价值的单项指标,P53大于0.4086U／mL可用于辅助确诊消化系统肿瘤转移；P53、CA19-9联合检测均阴性可用于辅助排除消化系统肿瘤转移.

关 键 词　P53；血清；转移；ROC曲线

中图分类号　R735

文献标识码　A

文章编号　1673-9701(2009)08-13-03

我国每年新发恶性肿瘤患者约200万,其中60％以上为消化系统肿瘤.目前手术仍是消化系统肿瘤的首选治疗手段,然而,即使是根治术后仍有部分患者死于局部复发或远处转移.其中一个重要的原因就是,在转移的早期常无任何临床表现,常规检查方法如CT、普通病理检查等很难发现.因此,及早发现转移是改善这部分患者预后的有效手段.临床用于监测消化系统肿瘤转移的肿瘤标志物如癌胚抗原(cEA)、糖抗原19-9(cA19-9)、糖抗原242(CA242)、癌抗原72-4(CA72-4),灵敏度和,或特异度不十分理想,具有一定的局限性.

针对这些问题,我们选择已知病情结果的55例患者,检测血清P53蛋白与肿瘤标志物,分析二者联合检测在辅助诊断消化系统肿瘤转移方面的价值和临床意义,现报道如下.

1材料与方法

1,1研究对象

2007年9月－2008年4月山西省肿瘤医院老年病科收治,经病理确诊的消化系统恶性肿瘤患者55例,均为根治术后,检测前2个月内未接受放化疗.男性35例,女性20例；年龄35～86岁；其中食管癌3例,胃癌20例,结直肠癌24例,肝癌4例,胰腺癌1例,胆囊癌3例.分为经临床确诊的转移组(19例)和来转移组(36例).转移组年龄中位数为57岁,未转移组年龄中位数为59岁,两组年龄相似(P等于0.456).转移组中男性11例,女性8例；未转移组中男性24例,女性12例,两组性别构成比差别无统计学意义(PearsonX2等于0.727,P等于0.394).健康体检对照者14例.

1,2实验方法

1,2,1血清P53蛋白的检测　所有标本采用双抗夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)定量测定血清P53蛋白水平.HumanP53ELISA试剂盒购自奥地利BenderMedsystems公司,产品号：BMS256.检测过程严格按说明书进行.

1,2,2血清CEA、CAl9-9、CA242、CA72-4的检测　血清CEA、CA19-9、CA242、CA72-4,均采用瑞典CanAg公司诊断试剂盒酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测,正常参考值分别为<3μg／L、<20U／mL、<12U／mL、

1,3统计学方法

统计分析应用SPSS11.0软件处理.计量资料采用中位数表示.组间比较采用秩和检验；性别构成比组间比较采用PearsonX2检验.各指标诊断价值运用受试者工作特征(receiveroperatorcharacteristic,ROC)曲线及四格表法分析.转移危险因素的筛选应用逐步Logistics回归分析.

2结果

2,1远处转移患者、未转移组患者与健康体检对照者血清P53蛋白水平比较

由于各组血清P53蛋白水平检测值呈非正态分布,故应用KruskalWallisH检验进行多个样本组间比较,两两比较用Nemenyi法,结果用中位数表示,见表1.结果显示,转移组血清P53蛋白水平高于未转移组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05)；未转移组血清P53蛋白水平高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05).

2,2血清P53蛋白辅助诊断消化系统肿瘤远处转移ROC曲线分析

ROC曲线见图1.由图1可知,ROC曲线下面积(AUC)为0.927,血清P53蛋白辅助诊断肿瘤转移的最佳临界值为0.4086U／mL.

2,3转移危险因素的Logistics回归分析

为观察血清P53蛋白以及CEA、CA19-9、CA242、CA72-4与转移的关系,对上述指标进行逐步Logistics回归分析(forwardLR),见表2.结果显示,P53、CA19-9、CA72-4为转移危险因素.其中血清1753蛋白值得关注,P53为阳性,即血清P53蛋白水平大于0.4086U／mL时,转移的危险性增加43.639倍.

2,4血清P53蛋白、CA19-9、CA72-4诊断转移各项参数的比较

各指标最佳临界值、灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比、诊断准确度见表3.结果显示,血清P53蛋白为诊断消化系统肿瘤转移最佳单项指标.

2,5联合检测

为提高诊断效率,本研究将两个阴性似然比最高的指标：血清P53蛋白和CA19-9联合检测.联合检测方法包括系列试验和平行试验.联合检测的各项参数见表4.结果显示,P53、CA19-9平行试验灵敏度、阴性似然比优于各单项指标及P53、CA19-9系列试验.

3讨论

转移(metaataaia)是恶性肿瘤的基本生物学特征,也是临床上绝大多数肿瘤患者的致死因素.有关转移分子机制的研究表明,它是一个多阶段的复杂的过程,受许多特殊基因的调控.

P53基因突变进而表达突变P53蛋白能使肿瘤细胞的转移潜能增加,当具有转移潜能的肿瘤细胞逃避免疫系统的攻击进入血液循环时,就有可能在外周血中检测到肿瘤细胞释出的P53蛋白.因此,我们采用已知病情的消化系统肿瘤患者的血清及健康人群的血清,检测血清P53蛋白水平,以了解P53蛋白水平的高低能否反映患者有无肿瘤转移.

本研究中,转移组和未转移组的性别构成比组间差异无统计学意义(PeamonX2等于0.727,P等于0.394).转移组年龄中位数为57岁,未转移组年龄中位数为59岁,两组年龄相似(P等于0.456),说明两组资料相近,结果有可比性.

表1的结果显示,转移组血清P53蛋白水平高于未转移组(P<0.05)和健康对照组(P<0.05),未转移组血清P53蛋白水平
也高于健康对照组(P<0.05).图1显示,血清P53蛋白辅助诊断消化系统肿瘤远处转移的ROC曲线下面积(AUC)为0,927,按照ROC曲线评价标准,AUC在0.9以上,有较高的诊断准确度,最佳临界值为0.4086U／mL.由表2对血清P53蛋白及肿瘤标志物的Logistics回归分析可知,P53及CA19-9、CA72-4为转移危险因素.作为转移危险因素上述指标用于辅助判断转移,其特异度和灵敏度是否较高呢?为此.我们对各指标运用四格表法进行了多个参数的分析,其中似然比是同时反映灵敏度和特异度的复合指标,较灵敏度和特异度更稳定.阳性似然比是真阳性与检测阳性的比值,其比值越大(如≥10),试验就越能区分出真患者；阴性似然比是检测阴性与真阴性的比值,其比值越小(如≤0.1),诊断试验就越能区分出真非患者.如果不能同时满足阳性似然比≥10,阴性似然比≤0.1.就应进行联合检测(包括系列试验和平行试验).

由表3结果可知,P53辅助判断消化系统肿瘤转移的各项参数均优于其他指标,灵敏度为84.2％,特异度为100.0％,阳性预测值为100.0％,阳性似然比为+∞,因此,P53是辅助诊断消化系统肿瘤转移有价值的单项指标,P53检测值大于OA086U／mL可用于辅助确诊消化系统肿瘤转移.

由于本研究中,不论是P53还是各肿瘤标志物,没有一项指标能同时满足阳性似然比≥10、阴性似然比≤0.1.因此,将两个阴性似然比最小的指标P53与CA19-9联合检测,联合检测方法包括系列试验和平行试验.①系列试验：当所有的指标均阳性才判断为转移.②平行试验：任意一个指标为阳性就判断为转移.表4的结果显示,P53、CA19-9平行试验,灵敏度为100％,特异度为61.1％,阴性似然比为0.所以,P53、CEA检测均阴性可用于辅助排除消化系统肿瘤转移.

术后转移是消化系统恶性肿瘤预后不佳的重要原因,目前对于术后转移,尤其是早期转移的诊断,临床上尚无医学界广泛认可的客观性好、灵敏度高、特异性强的金标准,主要依靠临床医师的体格检查及CT、MRI、超声等影像学检查,然而,即使是近年来新出现的正电子发射计算机断层显像(Positronemissiontomography,PET)或PET-CT也由于其昂贵,检测阳性率高,普及率低,临床应用受到了限制.本文提到的血清P53蛋白及P53、CA19-9联合检测对于辅助诊断消化系统肿瘤转移有重要价值,并且该检测操作简单,费用相对低廉,具有较高的临床应用前景.