原发胃癌中p15、p16基因蛋白表达检测

点赞:3946 浏览:9965 近期更新时间:2024-03-04 作者:网友分享原创网站原创

[摘 要]目的:检测胃癌患者手术切除后原发灶、转移灶及癌旁非癌组织中p15、p16基因蛋白表达情况,探讨p15、p16基因失活与胃癌的关系.方法:采用免疫组化方法以及计分制方法进行结果判定.结果:p15、p16基因在癌旁非癌组织、原发灶、转移灶中的蛋白表达的阳性率具有显著性差异,p15的蛋白表达比p16高,而且在癌旁非癌组织、原发灶和转移灶中阳性率逐渐降低.结论:p15、p16蛋白表达与胃癌癌变过程相关,可能是胃癌癌变过程的监测指标之一,某种程度上可以评价预后,p15、p16蛋白表达检测可以某种程度上作为胃癌的筛查指标之一.

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[关 键 词]胃癌;肿瘤抑制基因

[中图分类号]R735.2[文献标识码]A[文章编号]1673-7210(2007)06(c)-139-02

胃癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一,近年来的研究表明,胃癌的发生发展是一个多基因参与的多阶段过程,但这一过程的分子生物学水平的发病机制尚不完全清楚[1].p15、p16基因为细胞周期的负性调节因子,阻止细胞进入S期,故在肿瘤的发生中起重要作用[2].本实验采用免疫组织化学方法,检测50例胃癌患者手术切除后原发灶、转移灶及癌旁非癌组织中胃癌p15、p16基因蛋白表达情况,旨在探讨p15、p16基因失活与胃癌转移扩散等病理生物学行为的关系.

1材料与方法

1.1实验材料

1.1.1标本研究对象为1998年9月~1999年3月辽宁省肿瘤医院胃外科胃癌患者,选取手术切除后原发灶与转移灶、癌旁非癌组织配对的石蜡标本50例,其中男性32例,女性18例,男女比例为1.78∶1;最大年龄为79岁,最小年龄为39岁,平均年龄(57.11±8.61)岁.50例癌旁非癌组织均为非癌黏膜上皮.以上病例均经病理诊断证实,所有患者术前均未经术前放疗、化疗等.

1.1.2主要试剂及物品第一抗体及SP超敏试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司).

1.2实验方法

严格按照试剂盒说明书进行操作.

采用计分制方法进行结果判定:①胞浆染色,无染色计0分、淡计1分、棕计2分、棕褐色计3分;②高倍视野下计数细胞染色百分率,小于25%计0分、25%~50%计1分、50%~75%计2分、大于75%计3分.二者相加大于4分视为结果阳性.

1.3统计学处理

实验结果采用SPSS10.0统计软件处理,检验显著性水准取α等于0.05,P<0.05为有显著性并异.

2结果

采用S-P法对50例胃癌组织进行了p15、p16免疫组织化学检测,结果p15、p16基因在癌旁非癌组织、原发灶、转移灶中的蛋白表达的阳性率分别为72%(36/50)和64%(32/50)、30%(15/50)和26%(13/50)、22.6%(12/53)和17%(9/53),p15的蛋白表达比p16高,而且在癌旁非癌组织、原发灶和转移灶中阳性率逐渐降低,具有显著性差异(P<0.05)(图1~图4、表1).

3讨论

恶性肿瘤发生机制在于细胞内部基因结构和功能发生异常改变,因此,检测p15、p16基因表达改变对胃癌的诊断具有一定意义[1,3].至今,对成对的胃癌原发灶、转移灶和癌旁非癌组织的研究很少.p16基因在原发性肿瘤中虽然检不出突变,但存在不表达,检测p16有无缺失表达对胃癌早期诊断具有一定意义.有人报道p16在胃癌中有异常化,而p15在这些恶性瘤中还没有定论[4].

基因的化导致其相应蛋白的表达缺失被认为是散在发生的恶性肿瘤MSI出现的主要机制[5].本实验对50例胃癌癌旁非癌组织、原发灶、转移灶进行了p15、p16免疫组织化学检测,结果p15、p16基因在癌旁非癌组织、原发灶、转移灶中的蛋白表达的阳性率分别为72%(36/50)和64(32/50)、30%(15/50)和26%(13/50)、22.6%(12/53)和17%(9/53),p15的蛋白表达比p16的要高;而且在癌旁非癌组织、原发灶、和转移灶中阳性率逐渐降低,具有显著性差异.

相关研究表明p15基因启动子区高化可使p15基因失活,但在不同肿瘤中p15基因化的作用有差异[6],原发胃癌的p15基因及其化的异常集中在低分化胃癌,p15基因缺失和突变不是影响胃癌的主要因素,启动子区的高化可能在晚期胃癌中起一定作用[7].在胃癌中,p16基因失活与5'端启动子区域CpG岛异常化密切相关.近年来,国内外许多学者研究表明,不管是原发性胃癌组织还是胃癌细胞系,不管采取何种方法均发现了较高的p16基因异常化率,而非肿瘤组织中则没有或是出现极低的化率[8],这表明,p16基因失活是胃癌中的常见事件,并且与胃癌的发生、发展密切相关[9,10].

综上所述,我们研究了原发胃癌的p15、p16基因蛋白表达的异常,发现60%以上的异常率,因此p15、p16基因失活与胃癌的相关性,抑癌基因的失活可能在晚期胃癌中起一定作用.

[参考文献]

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[2]ChimCS,LiangR,TamCY,etal.Methylationofp15andp16genesinacutepromyelocyticleukemia:potentialdiagnosticandprognosticsignificance[J].JClinOncol,2001,19(7):2033-240.


[3]PuduvalliVK,KyritsisAP,HessKR,etal.PatternsofexpressionofRbandp16inastrocyticgliomas,andcorrelationwithsurvival[J].IntJOncol,2000,17(5):963-969.

[4]SakumaK,ChongJM,SudoM,etal.High-densitymethylationofp14ARFandp16INK4AinEpstein-Barrvirus-associatedgastriccarcinoma[J].IntJCancer,2004,112(2):273-278.

[5]SarbiaM,GeddertH,KlumpB.Hypermethylationoftumorsuppressorgenes(p16INK4A,p14ARFandAPC)inadenocarcinomasoftheuppergastrointestinaltract[J].IntJCancer,2004,111(2):224-228.

[6]LeeJH,ParkSJ,AbrahamSC,etal.FrequentCpGislandmethylationinprecursorlesionsandearlygastricadenocarcinomas[J].Oncogene,2004,23(26):4646-4654.

[7]LevanonD,BrennerO,OttoF,etal.Runx3knockoutsandstomachcancer[J].EMBORep,2003,4(6):560-564.

[8]OhgakiH,KleihuesP,SugimuraT.Experimentalgastriccancer[J].ItalJGastroenterol,1991,23(6):371-377.

[9]SmiragliaDJ,PlassC.ThedevelopmentofCpGislandmethylationbiomarkersusingrestrictionlandmarkgenomicscanning[J].AnnNYAcadSci,2003,983(1):110-119.

[10]JonesPA,NguyenC.ChromosomestructuralchangesinhumancancerandtheirreversalbyDNAmethylationinhibitors[Z].Programandabstractsof14thEORTC-NCI-AACRSymposiumonMolecularTargetsandCancerTherapeutics,November19-22,2002,Frankfurt,Germany.Abstract382.

(收高日期:2007-04-16)

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