苦参碱对皮肤伤口愈合的影响的

摘 要 ：目的：苦参碱对伤口愈合是否有影响,未见有关报道,为此,本实验通过小鼠背部皮肤伤口模型的建立,观察苦参碱对小鼠皮肤伤口愈合的影响,为进一步苦参碱的开发与应用提供实验依据.

方法：动物伤口实验模型是筛选有效促进伤口愈合药物的重要工具.

结果：本研究以小鼠背部伤口为模型,着重观察了苦参碱对伤口愈合过程的促进作用.

结论：苦参碱对伤口愈合有促进作用.

关 键 词 ：苦参碱伤口愈合

【中图分类号】R4【文献标识码】A【文章编号】1008-1879（2012）12-0014-02

机体皮肤直接与外界接触,易于受到各种损伤.创伤修复是创伤学乃至整个医学中最重要又是最基本的问题之一,也是医学中最古老的课题之一.自有人类起就有创伤,有创伤就有创伤愈合和组织修复[1].创伤愈合过程是一个非常复杂的过程,主要包括：①伤口早期变化；②伤口收缩；③肉芽组织增生；④表皮及其他组织增生等.伤口愈合延迟或不愈合不仅影响患者的身心健康,而且增加经济负担,有时甚至会危及患者生命.促进伤口愈合,减少病人的痛苦,是临床对伤口愈合进行治疗的主要措施.背部伤口实验动物模型是研究创伤愈合的主要模型,具有方便,直观和数据可靠等优点.

苦参碱（matrine）是从宁夏特色回药材豆科槐属植物苦豆子（Sophora alopecuroides Linn）中提取的四环喹嗪啶生物碱之一.近年药理研究表明,苦参碱具有抗炎[2]、降血脂[3]、扩血管[4]、抗心律失常[5]、抗柯萨奇病毒等多种作用.本课题组前期研究表明[6,7],苦参碱通过降低胆固醇、增强机体抗氧化酶活性、改善高脂血症大鼠心脏舒缩功能等作用而对高胆固醇血症大鼠心肌结构与功能的损伤具有保护作用,此外,苦参碱可增强环磷酰胺抑制Lewis肺癌生长的作用[8].

1材料与方法

1.1材料.

1.1.1动物.昆明种雄性小鼠250只,体重21.0±0.4g,清洁级,由宁夏医科大学实验动物中心提供.

1.1.2药品与试剂.苦参碱,白色粉末,纯度>99.8%,购自宁夏紫荆花药业股份有限公司；其余试剂均为分析纯.

1.1.3仪器.电子天平（北京恒科电子有限公司）；分析天平（中国AE100-S）；1130/Biocut超薄切片机（德国）.

1.2实验方法.

1.2.1药品的配制.苦参碱配置：准确称取苦参碱0.8000g溶于100ml浓度为0.9%的生理盐水得80mg/kg[9]的苦参碱高剂量、取一半体积的80mg/kg苦参碱溶液用生理盐水等体积稀释得40mg/kg的苦参碱中剂量、同理得20mg/kg的苦参碱低剂量.麻醉剂的配置：准确称取0.5000g钠溶于100ml 0.9%的生理盐水中.4%多聚甲醛配置：NaCl 8g,KCl 0.2g,Na2HPO42.89g,KH2PO40.2g溶于1000ml双蒸水中,配成0.01mol/L的PBS液（pH：7.2～7.4）,将40g多聚甲醛倒入配好的PBS液中,加热,混匀,温度控制在60℃以内.

1.2.2伤口制备.250只雄性昆明小鼠给予50mg/kg钠腹腔麻醉

后,背部电推去毛,暴露皮肤,用2%碘酒和75%酒精依次消毒,背部剪去全层皮肤,制备大小为1.5cm×1.5cm正方形的伤口,半透明

纸描

绘切口边缘,记录伤口大小后,动物随机分为4组,即生理盐水对照组,苦参碱20、40和80mg/kg剂量组.编号记录及归笼饲养.

1.2.3给药及取材方法.苦参碱组小鼠按20、40和80mg/kg剂量每天灌胃,对照组给予等体积生理盐水,于第3、5、7、9和11天,用半透明纸描绘记录其伤口未愈合的面积后,每组分别随机取出12只小鼠处死,剪下背部未愈合皮肤,1/2组织放入4%多聚甲醛溶液固定,用于进一步病理H&E染色分析,另外1/2组织-80℃冻存备用.

1.3检测指标.

1.3.1小鼠的一般情况.观察小鼠造模前、后体重,皮毛、运动、进食的变化等.

1.3.2伤口未愈合面积计算.所有小鼠在0,3,5,7,9和11天的伤口未愈合面积,将伤口边源描绘在半透明纸上,然后采用清华紫光A900扫描仪扫描并用Image—Pro⑧PlusVersion6.0（IPP）图像分析软件分析并计算面积.如图3和4所示：

1.4统计学方法.实验数据以均值±标准差表示（X±S）,采用t检验

进行统计学分析,以P<0.05为具有显著性差异.

2结果

2.1小鼠的一般情况：各组小鼠体重之间无明显变化,背部毛不断长长.

苦参碱对伤口小鼠模型体重的影响.

除第3天20mg/kg苦参碱给药组体重减轻未有统计学差异外,其余各组小组体重在伤口愈合过程中均未见显著性差异,结果见表1.

2.2小鼠伤口愈合情况.小鼠伤口随着时间的变化未愈合伤口随时间变化逐步愈合,伤口面积减小,（见图5）,第11天正常组小鼠伤口的愈合率为88.92%.苦参碱组20、40和80mg/kg剂量组对小鼠伤口愈合具有显著和促进作用（见表2,图6）.

3讨论

研究表明,组织创伤产生的缺损,人体自身能进行修补恢复,即创伤愈合.创伤愈合一般经历以下几个过程：①伤口早期变化：伤口局部有不同程度的组织坏死和血管断裂出血,数小时内便出现炎症反应,表现为红肿.②伤口收缩：2-3日后边缘的整层皮肤及皮下组织向中心移动,于是伤口迅速缩小,直到14天左右停止.③肉芽组织增生：大约从第3天开始从伤口底部及边缘长出肉芽组织填平伤口.④表皮及其他增生：创伤24小时内,伤口边缘的基地细胞即开始增生,并在凝块下面向伤口中心迁移,形成单层上皮,覆盖于肉芽组织表面.在创伤愈合中,肉芽组织起着重要作用.肉芽组织是由新生的成纤维细胞,毛细血管和少量炎性细胞所组成.其中含有丰富的血管,所以稍有损伤就容易出血.它们从创伤周围的正常组织处生长,渐渐向伤口缺损处伸展.而肉芽组织具有抗炎、抗感染保护创面、填补创口等作用. 国外学者[1]以大鼠为实验动物模型,进行背部大小为（2.0×2.0）cm2全层皮肤切除.本研究采用远低于大鼠的昆明种小鼠为模型,在其背部建立大小为（1.5×1.5）cm2的正方形创口,前期预实验观察到,小鼠背部伤口完全愈合需13-15天.本次实验时间为11天,以观察苦参碱对伤口愈合的促进作用.研究结果表明,生理盐水对照组小鼠背部伤口自第3天开始愈合,第11天愈合率达81.84%.苦参碱组小鼠分别给予20、40和80mg/kg的苦参碱后,小鼠背部伤口未愈合面积自第3天始具有明显的促进作用,在第11天时伤口愈合的面积为：88.92%,91.7%和91.69%,提示,苦参碱对伤口的愈合具有促进作用.本实验首次观察了苦参碱对伤口愈合的影响的研究,其作用机制有待进一步对组织样本进行检测分析与研究.

4结论

苦参碱对皮肤伤口愈合具有促进作用.