免疫法复制大鼠溃疡性结肠炎实验模型之探析

【摘 要 】　溃疡性结肠炎的发生与免疫因素有着密切联系,用免疫法复制大鼠溃疡性结肠炎实验模型可与溃疡性结肠炎患者身体的病理变化更接近.本法需要一定的设备、条件及相应的技术,实验周期长,但重复性好,较适合用于抗溃疡性结肠炎新药的筛选.

【关 键 词 】　免疫法；溃疡性结肠炎；模型

动物实验是现代医学和生命科学研究的一个重要基础和支柱,在实验动物身上复制人类疾病,是促进医学科学发展的重要途径之一,可为医学理论以及治疗和预防疾病的研究提供必不可少的资料和研究方法.目前复制溃疡性结肠炎动物模型的方法有多种,但尚未有一种模型与溃疡性结肠炎患者在致病因素、病理生理过程、免疫反应、临床表现、治疗手段等诸方面完全相同.但本病的发生与免疫因素最为密切,因此我们在实验时采取了免疫与局部刺激相结合的造模方法,这样使动物模型与溃疡性结肠炎患者身体的病理变化更接近,使实验研究更靠近临床,更具有说服力.兹就免疫法复制大鼠溃疡性结肠炎实验模型浅析如下：

1　免疫法造模的意义

最新的研究表明溃疡性结肠炎的发生是患者遗传背景、免疫系统、肠粘膜、肠道菌群及环境等多方面交互作用的结果[1].除遗传及肠道菌群因素外,肠粘膜免疫系统在该病的发病机制中便占核心地位.正常的非炎性肠粘膜的促炎细胞因子与抗炎细胞因子能保持完美的平衡,从而既能对抗肠道内病原体又不至因非致病性抗原产生过激的免疫学反应.但是在溃疡性结肠炎患者的肠粘膜中,这种平衡则被打破而倾向于促炎反应之侧,最终导致疾病的发生.因此现代医学实验研究中若采用免疫法复制溃疡性结肠炎病变模型,可最大程度上还原其病理本质,提高相关实验研究的科学价值.

2　造膜方法[2] [3] [4]

大鼠首次每只足趾内注射抗原（异体结肠粘膜）3mg,并于第10、17、24、31天分别于足趾、背部、腹股沟、腹腔内注射抗原6mg（末次注射不加福氏佐剂）.然后取血,用凝集法测定抗体,确定抗体产生后,对模型大鼠用乌拉坦麻醉（0.4ml/100g）,并进行下列操作（处理前禁食24小时）.用1.5%液2ml灌肠,留置1小时,用生理盐水洗脱排出.再用抗原液2ml（4mg/ml）,不加佐剂灌肠,留置2小时,然后洗净.根据文献,于造模第40天随机取大鼠8只,做病理学检查,确认结肠出现充血、水肿、急慢性细胞浸润、杯状细胞减少、腺体破坏及可见溃疡形成一系列变化后,认定造模成功.造模期间每日观察大鼠大便性状、厌食、倦怠、懒惰、拱背、畏寒、皮毛不洁、脱肛等症状和体征变化.

3　造模注意事项

在模型的制备过程中要注意以下几点：①刮取异体结肠粘膜时要保持较低的温度,以防粘膜蛋白变性.此操作可在冰台上进行.刮取时,力度适中,要防止将粘膜下肌肉层刮下,影响指标的观测.②组织匀浆粉碎前加适量的生理盐水稀释,但要注意适量,浓度大,不利于粉碎,浓度过小,粉碎后上清液的浓度达不到抗原的浓度要求.③组织匀浆用超声波细胞粉碎机粉碎时,要粉碎均匀,可根据颜色和质地的变化来掌握.同时要注意安全,防止粉碎针与玻璃器皿底部接触发生爆破.④结肠粘膜粉碎后提取的上清液与完全弗氏佐剂混合时,要混合均匀,形成油包水的抗原乳化液.⑤注射抗原时,要将注射部位用碘伏消毒,防止感染.注射尽量要选取一侧下肢,因大鼠前肢要辅助进食.⑥灌肠前麻醉要选好麻醉药,清楚不同麻醉药的安全剂量范围和致死剂量.可用10%乌拉坦进行麻醉.大鼠麻醉前要进行称重,根据重量每100g给予0.4ml.同时要根据大鼠的自然状态调整用量.大鼠麻醉后要注意保持实验室的温度.⑦灌肠前大鼠要禁食24小时,防止粪便停留在结肠中,影响造模药物与结肠粘膜的接触.根据实验观察,灌肠时通常有粪便的畜积,故可适当延长禁食时间,当然要考虑禁食大鼠对麻醉药的承受力.也可在实验前一周逐渐减少大鼠的食料,减少粪便的形成.⑧的浓度可适量增加,因为在灌肠时难免会有液的漏出,影响其对结肠粘膜的刺激作用,减少粘膜局部的损害,影响造模.

综上所述,用免疫法复制大鼠溃疡性结肠炎实验模型需要一定的设备、条件及相应的技术,实验周期长,但重复性好,动物模型与溃疡性结肠炎患者的病理变化更接近,适合于临床对溃疡性结肠炎病理及治疗的研究.