重组腺相关病毒介导的大鼠脂联素载体的构建与鉴定

点赞:30105 浏览:134704 近期更新时间:2024-01-01 作者:网友分享原创网站原创

摘 要 目的:克隆大鼠脂联素基因(Acrp30),并对载有脂联素的重组腺相关病毒(A)载体进行构建及鉴定.方法:根据Acrp30 的基因序列设计引物,上游引入EcoRⅠ位点,下游引入SalⅠ位点,以EX-A0242-M01- Acrp30 为模板扩增目的基因.将Acrp30 基因克隆入pUC19 载体中,获得重组质粒pUC19-Acrp30.然后用EcoRⅠ与SalⅠ酶切pUC19- Acrp30及质粒pSN,回收酶切片段,T4DNA连接酶16℃过夜,转化大肠杆菌DH5α 感受肽细胞,筛选阳性克隆获得pSN- Acrp30,EcoRⅠ/Sal 双酶切鉴定,并行全基因测序.结果:PCR电泳及酶切鉴定表明,pSN- Acrp30 重组成功,基因测序显示装入pSN 质粒中的Acrp30 基因正确.结论:脂联素病毒载体成功构建,可以满足脂联素基因研究和治疗的需要.

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关 键 词 :基因;脂联素;腺相关病毒