网站原创摘 要目的：探讨纸板法、全自动数字血型仪检测、U型微孔板法、试管法在无偿献血者血型鉴定中的应用价值.方法：采用纸板法对街头献血者进行ABO血型正定型检测,采用Poseidon全自动数字血型仪进行ABO血型和Rh(D)血型的批量鉴定,采用U型微孔板法进行ABO血型反定型批量检测,采用试管法进行ABO血型反定型补充检测.对4种不同检测方法的应用价值进行评价.结果：纸板法对13867例街头献血者进行ABO血型正定型检测,正确率99.88%.数字血型仪对ABO血型一次性判读正确率99.94%.U型微孔板法对ABO血型人工判读正确率99.98%.对ABO血型正反定型不合的8例标本,采用试管法进行反定型检测,结果与U型微孔板法相同.经血型研究室确证,数字血型仪正确检出正反定型不合2例,U型微孔板法正确检出正反定型不合5例.数字血型仪检测出Rh(D)阴性59例,经血型研究室确证56例.结论：全自动数字血型仪检测法和U型微孔板法的联合应用,实现了血型检测的批量化、自动化,具有较高的应用价值.
关 键 词纸板法全自动数字血型仪U型微孔板法试管法血型
AbstractObjective:Toinvestigatethevalueofcardmethod、automaticdigitalbloodtypinginstrument、Utypemicroplatemethod、tubemethodforbloodtypetestinvoluntaryblooddonors.Methods:CardmethodwasusedtotestABObloodtypewithpositivestereotypesofdonorsonthestreet.PoseidonautomaticdigitalbloodtypinginstrumentwasusedtotestABOandRh(D)bloodtypeinlargenumbers.UtypemicroplatemethodwasusedtotestABObloodtypewithstereotypesanti-stereotypesinlargenumbers.TubemethodwasusedtotestABObloodtypewithanti-stereotypes.Fourdifferentmethodswereevaluated.Results:13867blooddonorsonthestreetweredetected.TheaccuracyofABObloodtypeusingcardmethodwas99.88%.TheaccuracyofABObloodtypeusingdigitaltypinginstrumentwas99.94%.TheaccuracyusingUtypemicroplatemethodwas99.98%.Tubemethodwasusedtotest8specimenswithABOinpatiblepositiveandnegativestereotypes.TheresultswereidenticalwithUtypemicroplatemethod.Bloodresearchlaboratoryconfirmed:2specimenswithspecialbloodtypewerefoundbydigitaltypinginstrument,5specimenswithspecialbloodtypewerefoundbyUtypemicroplatemethod.59casesofRh(D)negativeweredetectedusingdigitaltypinginstrument,ofwhich56caseswereconfirmedbybloodresearchlaboratory.Conclusion:ComparedThebinationofautomaticdigitalbloodtypinginstrumentandUtypemicroplatemethodcandetectbloodtypeinlargenumbersautomatically.Themethodsareusefulwithhighvalue.
KeyWordscardmethod,automaticdigitalbloodtypinginstrument,Utypemicroplatemethod,tubemethod,bloodtype
按照卫生部《献血者健康检查要求》的规定,采供血机构必须进行献血者ABO血型正、反定型的检测.纸板法、试管法主要依靠人工操作进行血型鉴定［1］.随着血液检测技术的发展,为了实现血型检测的自动化、批量化,U型微孔板法、全自动数字血型仪检测被逐步推广应用.对不同方法的检测结果进行统计,对其应用价值进行归纳总结,现报告如下.
资料与方法
标本来源：成都血液中心无偿献血者标本13867例,均采用EDTA-K抗凝.献血者体检合格,年龄18～55周岁.
检测试剂：抗A、抗B血型定型试剂,使用前生理盐水1∶10稀释；RhD(IgM)血型定型试剂,使用前生理盐水1∶10稀释；3%～6%A、B型红细胞盐水悬液(本实验室自制).所有试剂均在有效期内使用.
仪器设备：Xantus全自动加样器、Neon全自动加样器、RSP全自动加样器、Poseidon全自动数字血型仪、梯形微孔反应板、微板孵育振荡器、台式微板离心机、XK96型微量振荡器、可调微量移液器、U型微孔板.
方法：①纸板法：在纸板圆圈反应区内滴加标本全血或红细胞,再分别滴加抗A、抗B或者抗D血型定型试剂.搅拌并充分混匀,使待检的样本充满整个反应区域.轻轻摇动纸板后观察,有凝块或细沙状为凝集；否则为不凝集.②全自动数字血型仪检测：采用Xantus全自动加样器/Neon全自动加样器,在预稀释板上用生理盐水预稀释标本红细胞,向Olympus梯形微孔板中先加入标本血浆、稀释标本红细胞,再向标本血浆中分别加入自制A型、B型红细胞,向标本红细胞中分别加入稀释的标准抗A、抗B、抗D血型定型试剂.再将微孔板放在振荡器上振荡约10秒,水平静置约30分钟,置入全自动数字血型仪中判读结果.Olympus微孔板孔壁呈微小均匀阶梯状,细胞在微孔中呈均匀分散状为凝集；细胞沉积于微孔底部尖端,呈圆点状,为不凝集.③U型微孔板法：采用RSP全自动加样器/Xantus全自动加样器/Neon全自动加样器,向U型微孔板加入血浆、自制新鲜红细胞.将微孔板放入微板离心机,1000r/分,离心2分钟.再将微孔板放入孵育振荡器,1000～1200r/分,振荡3～10分钟.在读片灯上肉眼观察并判断结果.细胞在U型微孔中呈大小不等的凝块或细沙状,为凝集；否则为不凝集.④试管法：使用可调微量移液器向试管中加入标本血浆、自制新鲜红细胞,1000r/分,离心1分钟.轻微震荡后观察,有凝块或细沙状为凝集；否则为不凝集［2］.
结果
全自动数字血型仪与纸板法对ABO血型正定型检测的结果：纸板法对13867例街头献血者进行ABO血型正定型检测,血型鉴定正确17例,正确率99.88%.17例血型鉴定正确均为人为因素导致,对其试管留样标本、血辫留样标本运用纸板法进行ABO血型正定型检测,均能得出正确的血型结果.全自动数字血型仪对13867例标本进行ABO正定型检测,结果正确率100%.
全自动数字血型仪与U型微孔板法对ABO血型反定型检测的结果：全自动数字血型仪对13867例标本进行ABO反定型检测,6例标本未能一次性判读成功,3例疑难血型未能正确检出.全自动数字血型仪进行ABO血型检测,一次性仪器判读正确率99.94%.U型微孔板法对13867例标本进行ABO反定型检测,与ABO血型正定型结果不符合的标本8例,经血型研究室确证,5例为不规则抗体等原因导致正反定型不合的疑难血型,其余3例为U型微孔板法人工判读正确.U型微孔板法对ABO血型人工判读正确率99.98%.两种方法检测结果经X2检验,全自动数字血型仪和U型微孔板法判读正确率比较,差异无统计学意义(X2等于3.001,P等于0.083＞0.05).
试管法对ABO血型反定型检测的结果：U型微孔板法检出与ABO血型正定型结果不符合的标本8例,对其采用试管法进行反定型检测,结果与U型微孔板法相同.
全自动数字血型仪对Rh(D)血型检测的结果：全自动数字血型仪检测出Rh(D)阴性59例,占检测标本数的0.43%.经血型研究室确证56例,检测正确率94.92%.
讨论
无偿献血标本血型检测是采供血系统日常工作的重要组成部分.纸板法操作简单方便,不需要专用的仪器设备,适合于街头献血者ABO血型正定型检测.纸板法完全依靠人工加样,人工判读,出现人为差错的几率较大.在气温较低的户外进行检测,纸板法所需凝集时间略有延长,反应时间不够时进行人工判读可导致血型鉴定不正确；操作时间过长,反应试剂干涸亦可导致误判.全自动数字血型仪检测经过加样模式优化,可一次性批量化完成ABO正反血型鉴定和Rh血型鉴定.整个过程由仪器完成,实现了从标本条码阅读、加样、加试剂、振荡、孵育到成像判读的可监控化,标准化的仪器操作降低了人为因素的影响.全自动数字血型仪有文字记录和原始影像记录,自动生成的血型检测结果可以长期保存,满足了采供血原始记录保存的相关要求,便于查询和追溯.为了保证鉴定结果准确,全自动血型仪检测需注意以下要求：①梯形微孔板底部和光路上不能有划痕和污渍,孔内不能有残余的蛋白,使用表面平滑、干净的微孔板才能保证判读结果正确.②标本完全抗凝,否则血凝块、纤维将影响检测结果；溶血、脂血影响结果判读时重新检测；微板孔内有气泡时需要处理掉气泡后再检测.U型微孔板法也适用于批量化血型检测,操作中外力原因可能破坏弱凝集反应,人工判读对弱凝集的界定受个人因素影响.全自动血型仪检测、U型微孔板法均需要专用的仪器,不适合街头献血者血型鉴定.试管法结果准确,但试管占用空间较微孔板大,不利于实现自动化、批量化检测.其他血型检测技术,如PCR血型基因型分型等,主要用于研究,不适合血型常规检测［3］.综上所述,纸板法、全自动数字血型仪检测、U型微孔板法、试管法应用于无偿献血者血型鉴定的不同环节,能提高检验效能,降低工作强度,提高血型鉴定准确性,有效地保障临床输血安全.