有关水质细菌学检验的讨

【中图分类号】R37【文献标识码】A【文章编号】1672－3783(2011)08－0390－01

【摘 要】本文对水介质中细菌总数和大肠杆菌指数几种新的检测方法的原理及其在环境领域中的应用进行了简述和分析.

【关 键 词】细菌总数；大肠杆菌指数；检测方法

水质细菌学检验是培水和污水水质分析工作中的一项重要指标.作为水质日常检测的七项指标(色度、浊度、细菌总数、大肠菌群、余氯、铁、锰)之一的细菌总数和大肠杆菌指数,能非常直观地反映水被细菌污染的程度.作为水质卫生学检测的两个常用的微生物基础指标,细菌总数和大肠杆菌指数在环境水质监测中起着非常重要的指标意义.

1水质中几种新的细菌总数的检测方法

1.1TTC营养琼脂法:该方法的操作与平皿计数法完全相同,仅将培养基成份稍作改动,添加了TTC染色剂.由于菌落染上红色,使原本与培养基颜色较难区分的细小菌落变得很容易辨认,提高了计数率.

1.2膜过滤法:该方法通过抽滤系统将细菌截留在滤膜上,再将滤膜放置在已含有培养基的无菌培养皿中培养.其培养基的形式有以下几种：（1）自配培养基后分装入平皿；（2）现成的已分装入滴瓶或安瓿瓶的培养液,使用时在平皿中先放人无菌吸收垫,再滴加培养液：

（3）与培养皿配套供应的干粉状培养基,在检测时可用少量无菌水湿润.膜过滤法中一般选择孔径大小为0.22μm的滤膜可以将所有的细菌截获.

1.3快速荧光法:该方法的原理是通过试剂促进活菌释放出较多的ATP活性物质,当活性物质与荧光酶反应时会发出荧光.对荧光计数就能得到细菌总数,该方法只需要短暂培养.

2水质中大肠杆菌指数的检测方法

目前,国际上公认的大肠菌群标准检测方法以多管发酵法和滤膜法为主.我国在水和食品卫生检验标准中规定的大肠菌群数的检测也是多管发酵法与滤膜法.但是其检测周期长,操作繁琐,难以适应污染源快速诊断的需要.

2.1DNA探针技术:DNA探针技术是用特异性的DNA探针进行大肠杆菌核糖体RNA(rRNA)的检测.目前DNA探针技术的研究主要是用来检测和鉴定医学临床上和食品中的大肠杆菌.检测各种大肠杆菌的核酸探针有多种,其中检测致病性大肠杆菌的报道最多,所利用的靶基因多为产毒素的基因,多采用生物素、荧光素等非放射性物质进行标记.荧光探针、寡核苷酸探针等已被用于检测水中的大肠杆菌,取得了很好的结果.其检测精度高,检测时间较短.为了更灵敏更快速地检测大肠杆菌,DNA探针技术多与PCR技术结合来检测大肠杆菌.

2.2聚合酶链反应技术:聚合酶链反应(PCR)方法已在致病性大肠杆菌的检测中有了比较深入而广泛的研究,取得了较好的应用成果.PCR技术具有多种不同种类,如实时定量PCR、多重PCR、等.目前,针对于大肠杆菌的PCR技术多种多样,其中以实时定量PCR和多重PCR来检测大肠杆菌的研究最多,发展最快.到目前为止,基于大肠杆菌PcR技术的研究主要是针对致病性大肠杆菌的致病基因,特别是肠出血性大肠杆菌0157.马颖等已将PCR技术应用于检测饮用水中大肠杆菌.研究证明,该法较适用于检测经氯消毒或臭氧消毒的饮用水中的大肠杆菌,检测结果与常规滤膜法有较好的一致性,且分析时间短,反应灵敏.

2.3免疫磁珠技术:免疫磁珠技术(Immunomagicbead,IMB)应用磁珠作为抗体载体,通过抗体抗原结合在磁力作用下发生力学移动,而达到分离特异性抗原的目的.应用此法从病人及与此相关的奶牛场奶牛的粪便中分离出多株山梨醇阳性的0157：H7大肠杆菌.Yu利用免疫磁珠技术结合荧光免疫法研究环境水样中的细菌和有毒物质的快速检测,还对该法和电化学发光技术进行了比较,结果表明该法虽然敏感度不如后者,但是却更直接更方便.

2.4荧光免疫测定技术:荧光免疫测定(FLuorescentimmunoassay,FIA)是以荧光素作为标记物,将免疫反应的特异性与灵敏性结合,通过荧光分光光度计测量荧光强度,推算待测物质的浓度.这种技术已被广泛应用.针对其容易被高背景干扰的缺点,时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术得到了快速发展.该法超过了放射性同位素标记所能达到的灵敏度,且还具有标记物制备方便,储存时间长,无放射性污染,检测重复性好,操作流程短,标准曲线范围宽,应用范围广泛等优点,是一种新型的免疫标记分析手段,具有广泛的发展空间.

2.5化学发光免疫分析技术:化学发光免疫分析(chemiluminescenceimmnoass,CLIA)利用化学发光物质作为标记物,将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合进行检测.化学发光免疫分析技术目前在环境领域中应用不多.

2.6免疫胶体金标记技术:免疫胶体金标记技术(Immnunocolloidal―goldtechique,ICGT)是以胶体金作为示踪标志物,应用于抗原抗体的一种新型免疫标记技术.该方法是中华人民共和国卫生部颁布的“关于全国肠出血性大肠杆菌0157：H7感染性腹泻应急处理预案”中的指定方法.该法具有快速反应的特点,但只能作为大肠杆菌的定性或半定量检测,较适用于一些致病性大肠杆菌的检测.

2.7联用分析方法:将多种方法相结合从而实现自动化操作和精确控制,可以大幅度地提高灵敏度.目前各种联用分析方法层出不穷.随着各学科和技术之间的相互渗透,色谱和流动注射法等技术与免疫分析(IA)相结合可以弥补免疫分析技术上的一些局限性,从而使之具有更好的选择性、灵敏性和快速测定等优点.目前各种联用技术的不断出现大大促进了国内外检测技术的灵敏度和精确度,为检测技术的进一步发展提供了更为广阔的发展空间.

3结语

综合上述分析,这些方法都比传统的标准方法速度快,以现代生物技术为核心并结合现代仪器技术的大肠杆菌快速检测技术的研究和应用具有良好的发展前景.但技术上的复杂性以及检测成本的昂贵无疑是这些新技术成为水质检测标准方法的瓶颈.因此,大规模的应用尚需在检测精度的提高、稳定性的保持、操作的简便和经济性等方面加强和提高.